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崔永霞鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
引物設(shè)計
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各位高手，知道一個酶的完整的cDNA序列，如何根據(jù)這個完整的cDNA序列設(shè)計引物，用于PCR擴(kuò)增。 [ Last edited by gyesang on 2013-5-3 at 19:46 ] |
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17樓2013-05-05 13:23:15
8樓2013-05-04 12:17:12
崔永霞15樓2013-05-04 20:23:13
樂樂3952
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2樓2013-05-03 12:32:49
崔永霞
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3樓2013-05-03 13:47:47
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4樓2013-05-03 14:08:10
5樓2013-05-04 00:22:57
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
崔永霞(gyesang代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵回帖應(yīng)助！ 2013-05-04 13:20:46
gyesang: 回帖置頂 2013-05-04 13:20:48
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gyesang: 回帖置頂 2013-05-04 13:20:48
| 一般大家都習(xí)慣用Primer5來設(shè)計引物，教程網(wǎng)上有，如果你找不到，留郵箱給我，我發(fā)給你。引物設(shè)計有 3 條基本原則：首先引物與模板的序列要緊密互補(bǔ)，其次引物與引物之間避免形成穩(wěn)定的二聚體或發(fā)夾結(jié)構(gòu)， 再次引物不能在模板的非目的位點(diǎn)引發(fā)DNA聚合反應(yīng)(即錯配)。具體實(shí)現(xiàn)這 3 條基本原則需要考慮到諸多因素，如引物長度（primer length） ，產(chǎn)物長度（product length） ，序列 Tm 值 (melting temperature)，引物與模板形成雙鏈的內(nèi)部穩(wěn)定性(internal stability, 用 ∆G 值反映)，形成引物二聚體(primer dimer)及發(fā)夾結(jié)構(gòu)（duplex formation and hairpin）的能值，在錯配位點(diǎn)（false priming site）的引發(fā)效率，引物及產(chǎn)物的GC 含量（composition）等等。這些因素在Primer5的引物設(shè)計過程中都有評價指標(biāo)，具體步驟在網(wǎng)上看看教程就行了，不難。 |
6樓2013-05-04 11:25:16
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
7樓2013-05-04 11:58:36
9樓2013-05-04 13:43:45
崔永霞
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10樓2013-05-04 19:48:26
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