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殼聚糖納米粒透射觀察-負(fù)染和不染（磷鎢酸）的差別？
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如題： 在殼聚糖納米粒的透射觀察中，有的文獻(xiàn)有進(jìn)行磷鎢酸負(fù)染，有的沒有； 得出來的結(jié)果規(guī)律一般是這樣的：有負(fù)染的殼聚糖納米粒表現(xiàn)為白色點(diǎn)，沒有負(fù)染的殼聚糖表現(xiàn)為黑色點(diǎn)。請(qǐng)問這個(gè)有什么差別嗎？到底為什么會(huì)這樣子呢？求解額，求助呀！ 下面列出相關(guān)依據(jù)： 白色點(diǎn)： 載基因殼聚糖納米粒的初步研究 四川大學(xué)碩士論文 2005； 低分子量殼聚糖納米粒的制備及其體內(nèi)分布研究 黑色點(diǎn)： 載蛋白三甲基殼聚糖納米�？诜o藥系統(tǒng)的研究 載SurvivinsiRNA的殼聚糖及水溶性殼聚糖納米粒的制備_鑒定及生物活性研 重慶大學(xué) 還有，大家購買的磷鎢酸影響大嗎？一般在哪買，是比較好的用來做TEM負(fù)染觀察的呢？求商家！ |
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papaverme
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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磷鎢酸用水或磷酸緩沖液配制成1％左右的溶液，用滴管一滴染色液在制好樣品的銅網(wǎng)上，1～2分鐘后，用剪成尖角的濾紙吸去染色液。再滴一滴純水在銅網(wǎng)上，用濾紙吸去，反復(fù)兩三次，這樣是為了洗去多余的磷鎢酸，然后靜置干燥。然后就可以用電鏡觀察了。 磷鎢酸中的重原子相對(duì)于有機(jī)分子中的碳?xì)溲醯容p原子來說，更能阻擋（散射）電子。所以，有磷鎢酸吸附（或沉積）的地方在TEM照片中看起來更黑，而有機(jī)物占據(jù)的地方看起來更亮。之所以叫“負(fù)染色”，就是因?yàn)楸蝗尽昂凇钡氖潜尘昂屯廨喞嬲信d趣的樣品部分是“白”的。也就是說，典型的經(jīng)過負(fù)染色的樣品是表現(xiàn)為黑背景中的白區(qū)。 一般有機(jī)物并不與磷鎢酸發(fā)生反應(yīng)，磷鎢酸只是沉積在有機(jī)物周圍形成“背景”或“輪廓”。但是不是所有的磷鎢酸染色都是負(fù)染色。有一些羥基和酰胺類會(huì)與磷鎢酸作用，出現(xiàn)正染色的效果，即有些含有這些基團(tuán)的有機(jī)物在TEM下看起來被染“黑”，最典型的是尼龍。 另外，有時(shí)候不成功的負(fù)染色，看到的結(jié)果也是“白底黑點(diǎn)”，其實(shí)雖然是做了染色的操作，但可能由于方法不對(duì)，或者樣品本身的性質(zhì)不適用負(fù)染色，結(jié)果跟沒染是一樣的。如果有機(jī)顆粒足夠大，不染色時(shí)就能看到“白底黑點(diǎn)”。 另一方面，如果染色很弱，一般只是給有機(jī)顆粒鑲上一個(gè)輪廓，如果染色劑量很大，則會(huì)出現(xiàn)很黑的“背景”。因此，對(duì)于很小的有機(jī)顆粒，如果染色很弱，只是一個(gè)輪廓圈，電鏡放大倍數(shù)不夠的時(shí)候，看起來就是一個(gè)小黑點(diǎn)了。就好像一個(gè)紙上畫一個(gè)空心圈，站遠(yuǎn)了看也可能成一個(gè)小黑點(diǎn)。 樓主前面提到的“白底黑點(diǎn)”是哪一種情況，我這里看不到文獻(xiàn)就不妄議了。 |
12樓2013-05-09 23:02:49
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科研，科研，科研，努力科研，成果會(huì)有時(shí)……！
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papaverme
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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| 在google圖片上搜了下，好像染后黑的白的都有，http://www.google.pl/search?um=1 ... sphotungstic%20acid |
14樓2013-05-10 00:47:45
16樓2013-05-10 09:06:37
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