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[求助]
利用Red重組系統(tǒng)進行乳酸菌基因敲除問題
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本人最近嘗試利用Red重組系統(tǒng)進行乳酸乳球菌的基因敲除，嘗試利用pKD46電轉乳酸菌，但是涂板得不到正確菌株。問過一些前輩后推測可能是因為質粒上沒有乳酸菌相關的復制子�？墒怯形墨I中說利用pKD46完成了乳酸菌的基因敲除，因此不敢確定。 而且現(xiàn)在手頭上也沒有別的質�？捎�，因此想嘗試在pKD46中加入一個乳酸菌中的復制子，使其變成穿梭質粒。請問如果這樣做的話是不是可以像普通的酶切連接一樣，將復制子片段克隆下來，連接在pKD46上即可？還是說有其他方面的要求？ 在這里想問一下有沒有哪位前輩也在做這方面的工作，能不能指點一二？多謝多謝！！ |
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2樓2015-03-27 10:15:48
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