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rivergf銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
基因敲除后遇到很怪的現(xiàn)象，求解釋。謝謝！
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我的菌株基因組存在兩種酶，分別為A酶、B酶。 1、B酶有兩個(gè)拷貝，記作B1、B2 2、A酶與B1酶的閱讀框緊鄰，但A酶的閱讀框處于反義鏈，B1酶處于正義鏈，B2的閱讀框離B1相距1000多個(gè)閱讀框。 3、A、B酶分別催化的反應(yīng)如下： A酶將底物E轉(zhuǎn)化為F、G、H； B酶以F為底物，將其轉(zhuǎn)化為E。 4、當(dāng)單獨(dú)敲除B1時(shí)，發(fā)現(xiàn)A大幅上調(diào)； 當(dāng)單獨(dú)敲除B2時(shí)，發(fā)現(xiàn)A基本不上調(diào)； 當(dāng)同時(shí)敲除B1、B2時(shí)，發(fā)現(xiàn)A大幅上調(diào)，幅度略低于單獨(dú)敲除B1時(shí)。 5、我認(rèn)為A與B1緊鄰，可能存在一定的互作。導(dǎo)致單獨(dú)敲除B2時(shí)，A沒(méi)有上調(diào)。請(qǐng)問(wèn)有沒(méi)有誰(shuí)看到過(guò)類似的文獻(xiàn)，或者有更好的解釋。 敬請(qǐng)賜教，或推薦類似研究文獻(xiàn)！ 謝謝！ 圖片2.png 圖片1.png |
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renzhiq
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8樓2013-05-09 09:35:13
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【答案】應(yīng)助回帖
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wizardfan: 金幣+1, 謝謝參與 2013-05-09 19:43:58
wizardfan: 金幣+1, 謝謝參與 2013-05-09 19:43:58
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我認(rèn)為還是從反式因子角度考慮可能會(huì)有突破，你可以檢測(cè)不同的敲除情況下對(duì)于A，B1，B2的啟動(dòng)子區(qū)域的特定的結(jié)合蛋白質(zhì)是否有所不同？這步只要做個(gè)凝膠阻滯電泳或足跡法就行。 如果這種方法檢測(cè)不出來(lái)，那就要考慮蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用了，可以用不同的熒光蛋白標(biāo)記不同的蛋白質(zhì)，然后用熒光顯微鏡觀測(cè)不同的敲除狀況下的與轉(zhuǎn)錄因子相互作用的反式因子。 |
10樓2013-05-09 12:01:07
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