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Grace葡萄新蟲 (初入文壇)
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[求助]
southern blotting 實(shí)驗(yàn)問(wèn)題求助！
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探針的標(biāo)記 是什么時(shí)候標(biāo)記呢？我已經(jīng)制備完探針了 保存在-20，沒有加marker，這個(gè)怎么辦？可以直接往里加嗎？ 酶切沒有條帶 DNA的濃度是500ng/ml 我加了15ul左右到體系里 體系是40ul 可是酶切之后什么都沒有 沒有帶 點(diǎn)樣孔里什么也沒有 我用的是hind III 這是為什么呢？是DNA降解了嗎？ southern 的圖片 什么樣的算是成功的吶？ |
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“酶切沒有條帶 DNA的濃度是500ng/ml 我加了15ul左右到體系里 體系是40ul 可是酶切之后什么都沒有 沒有帶 點(diǎn)樣孔里什么也沒有” 這種情況肯定是你的DNA在酶切過(guò)程被降解了，最有可能的是你用的水出問(wèn)題了，檢查一下你的水，用個(gè)不同來(lái)源的水試試。 不知道你的探針是用什么方法表的，同位素還是DIG？ 探針里面加Marker？不是很懂，為什么要加marker？我做的時(shí)候，是從來(lái)沒有加過(guò)的 |
2樓2013-05-04 19:21:19
wxf8470
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先做預(yù)酶切，證明你的DNA沒問(wèn)題，酶切沒問(wèn)題，之后再轉(zhuǎn)膜；轉(zhuǎn)好的膜在4度冰箱放一兩個(gè)星期是可以的，我們?cè)胚^(guò)一個(gè)月的還能用。 之后再標(biāo)記探針，忘了加Marker最好重新標(biāo)記，否則大小分不清圖是不能用的。 |
3樓2013-05-04 23:45:56
Grace葡萄
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7樓2013-05-07 10:56:40
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