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跪求：蛋白質(zhì)電泳條帶老是跑不開(kāi)去怎么辦
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本科畢業(yè)論文跑蛋白質(zhì)電泳，跑了幾次蛋白質(zhì)條帶都聚在前面，溶液又重新配的也還是不行，別同學(xué)用我們的溶液條帶都跑開(kāi)了，但我們還是不行，膠濃度應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題，我們用的12%的分離膠，5%的濃縮膠，這個(gè)膠濃度下別同學(xué)的marker都是分散的，我們的就不行，我們用了12mA和20mA的電流，長(zhǎng)的時(shí)候跑了近三個(gè)小時(shí)溴酚藍(lán)都跑過(guò)了還不行，難道我們的操作有問(wèn)題，但實(shí)在不知道錯(cuò)在哪里有經(jīng)驗(yàn)的師哥師姐指一條明路，小妹先在這謝謝了 IMG_20130508_082129098.jpg IMG_20130508_082228506.jpg |
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 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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首先檢查一下所用試劑是否配置正確，如丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺的比例，一般都是29:1的40%儲(chǔ)液體；分離膠Tris-HCl的pH值是否是8.8，一般濃度為1.5M；AP、SDS、TEMED是否新鮮。 然后是儀器是否能提供穩(wěn)定的電流/電壓，參數(shù)方面是否設(shè)置有錯(cuò)誤，例如你要12mA，其他兩個(gè)值電壓和功率是不是調(diào)成了固定值，我用的時(shí)候是用哪個(gè)值哪個(gè)值就固定，其他兩個(gè)值調(diào)到最大。 建議你看下你同學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法，和自己的比較一下看有什么不同，然后看看是不是自己的問(wèn)題。 |
8樓2013-05-09 11:08:13
bullfrog325
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| 樓主你在用溴酚藍(lán)染膠的時(shí)候一定有碰到膠吧, 對(duì)于12%的膠來(lái)說(shuō), 韌性是很好的, 你捏住一個(gè)角可以把它提起來(lái)的(甚至還可以輕輕地左右晃動(dòng)). 如果樓主發(fā)現(xiàn)它軟得不行好像輕輕一捏就爛掉的話問(wèn)題就是在膠上面. 樓主的跑膠緩沖液看上去沒(méi)問(wèn)題, 建議換一瓶acrylamide. |
2樓2013-05-08 23:53:01
mitocam
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hello青果: 金幣+1, ★有幫助, 我們好像確實(shí)是制膠的問(wèn)題，移液槍沒(méi)校正可能產(chǎn)生了影響，我們用了10%的膠跑了，效果好了一點(diǎn) 2013-05-11 18:31:15
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hello青果(gyesang代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-05-10 13:05:25
hello青果: 金幣+1, ★有幫助, 我們好像確實(shí)是制膠的問(wèn)題，移液槍沒(méi)校正可能產(chǎn)生了影響，我們用了10%的膠跑了，效果好了一點(diǎn) 2013-05-11 18:31:15
| 我跑過(guò)這樣的，樓主制膠的時(shí)候注意點(diǎn)，我那次是因?yàn)槟z不好，分離不好，至于哪里不好，我到現(xiàn)在也不明白。再配置一次，讓你同學(xué)在旁邊看著你。 |
10樓2013-05-09 11:34:13
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