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stevenshi021

新蟲 (小有名氣)

【答案】應(yīng)助回帖


感謝參與,應(yīng)助指數(shù) +1
sunzhengwang(gyesang代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵回帖應(yīng)助! 2013-05-10 12:24:31
我想是你的洗脫用了TEbuffer了,這樣導(dǎo)致R會稍微變高,2.2之類都是可以接受的
11樓2013-05-10 10:54:47
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laojiu9878

至尊木蟲 (知名作家)

九牛

【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與,應(yīng)助指數(shù) +1
有時間分光光度計騙人無底線
但愿人長久
12樓2013-05-10 10:57:48
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jiaoxiayoulu

新蟲 (小有名氣)

引用回帖:
4樓: Originally posted by bullfrog325 at 2013-05-09 22:03:31
我這里量出來一直是2.1的樣子, 沒問題的.

這說明純度還是很高的,是嗎?
13樓2013-05-10 11:01:59
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louisa俊

銀蟲 (小有名氣)

【答案】應(yīng)助回帖

這個得看各個波長代表什么,我們這一般A260/A280在1.7幾,數(shù)據(jù)還是可以用的。但是超過2,我就不知道了。。你是用試劑盒提的嗎??你再結(jié)合試劑盒說明書看看。。。。
14樓2013-05-10 11:31:41
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chinatiger

木蟲 (著名寫手)

【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★
感謝參與,應(yīng)助指數(shù) +1
sunzhengwang(gyesang代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵回帖應(yīng)助! 2013-05-10 13:00:10
gyesang: 回帖置頂 2013-05-10 13:00:24
sunzhengwang: 金幣+2, ★★★很有幫助 2013-05-10 15:16:13
1949stone: MolEPI+1, good 2013-05-11 20:30:21
如果在2.1之上,說明可能存在DNA污染。此外,單純看比值意義不大,下列文字僅供參考:
1. A260nm 是核酸最高吸收峰的吸收波長,最佳測量值的范圍為 0.1 至 1.0。如果不在此范圍,稀釋或濃縮樣品,使 之在此范圍內(nèi);如果吸光度小于 0.05,檢查是否存在操作因素(如移液不準(zhǔn)確,樣品內(nèi)有懸浮物等)影響。 DNA 樣品的 A260 吸光度值是否>0.1。(請注意,這個值跟儀器無關(guān),核酸的吸光度必需大于 0.1,其值才 有效和可靠,因為樣品中的雜質(zhì)和顆粒這些不純物的干擾通常會對光有一定吸收,其值<0.1);

2. A280nm, A270nm 是蛋白最高吸收峰的吸收波長,比值可進行核酸樣品純度評估:純 DNA 的 A260/A280 比值為 1.8,純 RNA 為 2.0。如果比值低,表示受到蛋白(芳香族)或酚類物質(zhì)的污染,需要純化樣品。比值=1.5 相當(dāng)于 50% 蛋白質(zhì)/DNA 溶液.酚的最大吸收峰在 270nm。

3. A230nm 是碳水化合物最高吸收峰的吸收波長,比值可進行核酸樣品純度評估:純 DNA 和 RNA 的 A260/A230 比值為 2.5。若比值小于 2.0 標(biāo)明樣品被碳水化合物(糖類)、鹽類或有機溶劑污染,需要純化樣品。A230 產(chǎn)生 負(fù)值主要是由于在很低 DNA 濃度的溶液中的一些其他成分的干擾所導(dǎo)致的。在下一個測定中,需要降低樣 品的稀釋度,A230 的負(fù)值會被校正。

4. A320nm 或 A340nm 為檢測溶液樣品的濁度和其他干擾因子。該值應(yīng)該接近0.0。如果不是,標(biāo)明溶液中有懸浮物,需要純化樣品。純樣品的A320一般是 0。

5. A260/A280和A260/A230 是核酸純度的指示值。純度好的DNA或RNA,在pH7-8.5 下A260 / A280的比值應(yīng)該在2.0 或2.5。純凈的樣品比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物、鹽(胍鹽)等,較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0 。

當(dāng) 0.5%BSA蛋白質(zhì)污染時,蛋白污染會導(dǎo)致260和280的數(shù)值都下降,其凈結(jié)果是260/280比值下降,但260/280的比值變化并不顯著,正如分子克隆3所說。但蛋白殘留會導(dǎo)致230的數(shù)值顯著上升,顯著影響260/230的比值。也就是說,如果RNA樣品的260/280=1.7,260 /230=0.5,那么就應(yīng)該考慮污染原因不是胍鹽殘留,而是蛋白殘留.

其他:
用分光光度計測量RNA時,用水而不是用TE 緩沖液稀釋RNA樣品會造成A260/A280比值下降。原因是低離子強度和低pH溶液會增加280 nm處的光吸收值。
加氯仿離心后取上清的時候千萬不要貪多 ,那樣就很容易被蛋白污染,所以現(xiàn)在一般取400ul左右。
當(dāng)260/230<1時,只有兩種情況。一是胍鹽污染,二是蛋白污染。
15樓2013-05-10 11:39:21
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springnamao

金蟲 (小有名氣)

引用回帖:
10樓: Originally posted by jiaoxiayoulu at 2013-05-10 10:50:29
確定沒錯???...

應(yīng)該沒錯,要么就是記反了
生如夏花
16樓2013-05-10 15:00:34
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sunzhengwang

鐵蟲 (小有名氣)

引用回帖:
11樓: Originally posted by stevenshi021 at 2013-05-10 10:54:47
我想是你的洗脫用了TEbuffer了,這樣導(dǎo)致R會稍微變高,2.2之類都是可以接受的

一般在2.04左右徘徊
一手生存,一手夢想
17樓2013-05-10 15:18:56
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sunzhengwang

鐵蟲 (小有名氣)

引用回帖:
14樓: Originally posted by louisa俊 at 2013-05-10 11:31:41
這個得看各個波長代表什么,我們這一般A260/A280在1.7幾,數(shù)據(jù)還是可以用的。但是超過2,我就不知道了。。你是用試劑盒提的嗎??你再結(jié)合試劑盒說明書看看。。。。

trizol提的
一手生存,一手夢想
18樓2013-05-10 15:19:30
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傷何處

木蟲 (正式寫手)

【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與,應(yīng)助指數(shù) +1
260/280>2.0 也有可能是RNA發(fā)生降解了,內(nèi)部基團外露,導(dǎo)致對260nm波長的光吸收值增大。樓主電泳結(jié)果怎么樣?
對也罷,錯也罷;正也罷,逆也罷;通途也好,崎嶇無妨……但問,吾心堅否?若堅,縱使歧路,以鐵心,貫穿而過,亦為大道!不堅,便是坦途,也難登臨絕頂,觀險峰
19樓2013-05-11 20:24:00
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sunzhengwang

鐵蟲 (小有名氣)

引用回帖:
19樓: Originally posted by 傷何處 at 2013-05-11 20:24:00
260/280>2.0 也有可能是RNA發(fā)生降解了,內(nèi)部基團外露,導(dǎo)致對260nm波長的光吸收值增大。樓主電泳結(jié)果怎么樣?

電泳結(jié)果還不錯,
一手生存,一手夢想
20樓2013-06-17 13:43:24
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