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胖虎金蟲 (正式寫手)
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[求助]
酶動力學(xué)
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求教給位大俠，酶動力學(xué)中吸光度怎么轉(zhuǎn)換成反應(yīng)速度。 還有我在確定抑制劑抑制類型的試驗(yàn)中，我的底物濃度跟酶濃度以及他們的量怎么確定？ 是否會影響我的Km跟Ki？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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- 附件 2 : LowpotentialdetectionofNADHwithPrussianBluebulkmodified.pdf
- 附件 3 : AprobeforNADHandH2O2amperometricdetectionatlowappliedpotentialforoxidaseanddehydrogenasebasedbiosensorapplications-BB(2007).pdf
- 附件 4 : AcoupledassaymeasuringMycobacteriumtuberculosisantigen85CenzymaticactivityOriginal-AB(2009).pdf
- 附件 5 : NADH-coupledmicroplatephotometricassayforkineticstudiesofATP-hydrolyzingenzymeswithlowandhighspecificactivities-AC(2003).pdf
- 附件 6 : Science-2011-NADH-coupledmicroplatephotometricassayforkineticstudiesofATP-hydrolyzingenzymeswithlowandhighspecificactivities.pdf
- 附件 7 : Spectrophotometricdeterminationoffunctionalcharacteristicsofproteinkinaseswithcoupledenzymaticassay-FEBS(1991).pdf
- 附件 8 : Acontinuouskineticassayforadenylationenzymeactivityandinhibition-AB(2010).pdf
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2樓2013-05-09 16:13:18
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4樓2013-05-09 21:37:11
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大俠，我看了一下，你看下面這個(gè)可行嗎？ 根據(jù)Lamber t- Beer 定律,溶液的吸光度值與其濃度成正比,故可用其吸光度值( Abso rbance) A (無量綱) 表示其濃度, 因此實(shí)驗(yàn)中反應(yīng)速率單位為: s- 1. 將一定量底物與堿性磷酸酶混合均勻后,對溶液每隔0. 25s 測一次產(chǎn)物的濃度共測8 次, 對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行線性回歸, 求得直線斜率k, 即在該段時(shí)間內(nèi)的平均反應(yīng)速率. 設(shè)2min 后的底物濃度值Sp , 由于時(shí)間間隔短,可認(rèn)為k 值是底物濃度為Sp 的瞬時(shí)反應(yīng)速率.改變反應(yīng)初始時(shí)的底物的量,并重復(fù)以上過程四次, 可求得五組有序?qū)崝?shù)對( Sp , k) . 傳統(tǒng)的處理過程是以1/ S 為橫坐標(biāo),以 1/ v 為縱坐標(biāo)作圖, 得到一條直線其縱截距為 1/ Vmax, 橫截距為- 1/ K m. 或者下面地址里面的可行么？ http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=3050790&from=portal |
7樓2013-05-10 16:03:57
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8樓2013-05-11 12:10:15
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每隔0. 25s 測一次,這個(gè)速度能達(dá)到嗎？ 還是文獻(xiàn)錯(cuò)了？ 這個(gè)時(shí)間必須要這個(gè)嗎？ 可以變動嗎？ 就跟下帖里面一樣，一分鐘兩分鐘http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=3050790&from=portal |
9樓2013-05-11 13:12:15
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