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海里的水泡

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[求助] 如何有效降低絲狀真菌產(chǎn)抗生素過程中極易染菌的問題？

目前在做一種海洋絲狀真菌的抗生素?fù)u瓶發(fā)酵，由于該菌種子培養(yǎng)時(shí)間要4-5天，發(fā)酵時(shí)間要11天以上，做了很多批實(shí)驗(yàn)，大部分是染菌的。染菌的直接結(jié)果就是產(chǎn)量下降或者沒有產(chǎn)量。在過程中鏡檢發(fā)現(xiàn)，在顯微鏡下菌絲和雜菌（主要是細(xì)菌）都有生長(zhǎng)。
由于目前使用的天然培養(yǎng)基，所以培養(yǎng)基中有很多類似豆粉之類的固形物的存在。滅菌的時(shí)候已經(jīng)額外延長(zhǎng)了滅菌時(shí)間。
由于目前做不到很純的液體種子，所以種子都是從固體平板上挑取單菌落來進(jìn)行培養(yǎng)的。
不知道有沒有什么比較好的方法能減少染菌幾率?

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1樓 2013-05-10 13:17:26

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Andyllk

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【答案】應(yīng)助回帖

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zhang8826857: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖 2013-05-10 16:24:39
海里的水泡: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-05-12 01:52:08

1 好好對(duì)實(shí)驗(yàn)室消毒
2 注意無菌操作，特別是接種時(shí)瓶口不要和手，紗布接觸。
3 天氣熱細(xì)菌生長(zhǎng)快，適當(dāng)降低溫度。
4 可以加點(diǎn)氯霉素等抗菌素，但可能干擾你的產(chǎn)物檢測(cè)。
另外你可以制成菌懸液接種看看是不是能縮短周期

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2樓2013-05-10 14:00:49

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2樓: Originally posted by Andyllk at 2013-05-10 14:00:49
1 好好對(duì)實(shí)驗(yàn)室消毒
2 注意無菌操作，特別是接種時(shí)瓶口不要和手，紗布接觸。
3 天氣熱細(xì)菌生長(zhǎng)快，適當(dāng)降低溫度。
4 可以加點(diǎn)氯霉素等抗菌素，但可能干擾你的產(chǎn)物檢測(cè)。
另外你可以制成菌懸液接種看看是不是能縮 ...

1.實(shí)驗(yàn)室我只能盡可能控制潔凈，畢竟別人還有做其它微生物的。
2.無菌操作的時(shí)候接觸瓶口很容易染菌嗎？之前不是很注意這個(gè)。只是控制火焰周圍。
3.這菌培養(yǎng)在25度，算是低溫微生物了。
4.抗生素添加我在考慮，有什么好的建議嗎？因?yàn)槲耶a(chǎn)的是抗真菌的抗生素，對(duì)細(xì)菌沒什么作用。
5.菌懸液沒做過，有什么需要注意的地方嗎？主要是我現(xiàn)在無法控制不染菌。。。

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3樓2013-05-10 14:42:43

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dayshow

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【答案】應(yīng)助回帖

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海里的水泡: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-05-12 01:52:15

氯霉素加點(diǎn)，搖瓶還是發(fā)酵罐實(shí)驗(yàn)？搖瓶接種沒染應(yīng)該沒多大問題，發(fā)酵罐的話，因素就多了

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4樓2013-05-10 18:27:19

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4樓: Originally posted by dayshow at 2013-05-10 18:27:19
氯霉素加點(diǎn)，搖瓶還是發(fā)酵罐實(shí)驗(yàn)？搖瓶接種沒染應(yīng)該沒多大問題，發(fā)酵罐的話，因素就多了

搖瓶還可以控制一定比率不染，但是做了幾批發(fā)酵罐，無一幸免，全染菌。
加抗生素的話，會(huì)不會(huì)對(duì)雜菌產(chǎn)生抗性？我比較關(guān)心是否可以將添加抗生素作為常規(guī)的抑菌手段。

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5樓2013-05-10 22:55:57

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dayshow

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5樓: Originally posted by 海里的水泡 at 2013-05-10 22:55:57
搖瓶還可以控制一定比率不染，但是做了幾批發(fā)酵罐，無一幸免，全染菌。
加抗生素的話，會(huì)不會(huì)對(duì)雜菌產(chǎn)生抗性？我比較關(guān)心是否可以將添加抗生素作為常規(guī)的抑菌手段。...

菌種沒帶菌吧

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6樓2013-05-11 20:00:42

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6樓: Originally posted by dayshow at 2013-05-11 20:00:42
菌種沒帶菌吧
...

我現(xiàn)在手上原始的菌種是別人那保藏的菌液。自己目前用來傳代什么的都是用平板，因?yàn)槭钦婢詴?huì)長(zhǎng)出很大的單菌落，沒有在菌落附近觀察到明顯的染菌痕跡，鏡檢有的時(shí)候會(huì)發(fā)現(xiàn)有類似細(xì)菌的存在，難道我平板上觀察到的形態(tài)是細(xì)菌和真菌的共生？之前做其它菌種的時(shí)候都沒這么個(gè)染菌法，所以沒遇到過類似情況，如果朋友你了解相關(guān)的情況，還望具體指點(diǎn)一下。

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7樓2013-05-12 01:50:34

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海里的水泡: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-05-14 09:57:44

建議做下菌種純化吧，合適倍數(shù)下平板稀釋涂布，挑單菌落搖瓶培養(yǎng)，菌落不需要長(zhǎng)到很大，否則會(huì)偏老。培養(yǎng)基開始粘稠時(shí)保存到若干支到甘油管中，-20度保存，可以接發(fā)酵搖瓶驗(yàn)證種子。上罐的時(shí)候可以甘油管接種到種子瓶。進(jìn)罐時(shí)可以按40mg/L發(fā)酵培養(yǎng)基的比例加過濾除菌的卡那霉素水溶液。

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8樓2013-05-13 17:14:33

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8樓: Originally posted by 江湖笑 at 2013-05-13 17:14:33
建議做下菌種純化吧，合適倍數(shù)下平板稀釋涂布，挑單菌落搖瓶培養(yǎng)，菌落不需要長(zhǎng)到很大，否則會(huì)偏老。培養(yǎng)基開始粘稠時(shí)保存到若干支到甘油管中，-20度保存，可以接發(fā)酵搖瓶驗(yàn)證種子。上罐的時(shí)候可以甘油管接種到種子 ...

想咨詢下加氨芐是不是也可以？

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9樓2013-05-14 09:59:38

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有針對(duì)性地做一些對(duì)照空白試驗(yàn)來確定污染原因吧。

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竹杖芒鞋輕勝馬，一蓑風(fēng)雨任平生。

10樓2013-05-14 10:30:55

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