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yongleixie金蟲 (正式寫手)
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[求助]
FISH圖片求助 已有1人參與
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最近在做污水活性污泥中氨氮細(xì)菌的FISH，做出的圖片感覺(jué)不是細(xì)菌的發(fā)光，哪位大俠幫忙看一下是不是目的細(xì)菌發(fā)光，還是污泥中的一些自發(fā)光或者是其他原因？ 熒光圖片.jpg [ 來(lái)自科研家族 污水污泥家族 ] |
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carlsnow
銅蟲 (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
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yongleixie: 金幣+10, ★★★很有幫助 2014-01-02 16:53:23
yongleixie: 金幣+10, ★★★很有幫助 2014-01-02 16:53:23
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一般情況做FISH，你即便要看的是AOB，可能還是要做一個(gè)DAPI的染色（熒光顯示所有微生物），這樣在同一個(gè)視野下，根據(jù)不同熒光的強(qiáng)度比例，你可以分析在你的樣品中，AOB占所有微生物的比重。 這張F(tuán)ISH圖片，個(gè)人感覺(jué)可能有以下幾個(gè)問(wèn)題： 1. FISH引物不知道樓主用的是哪個(gè)序列，對(duì)于AOB的特異性如何，因?yàn)閭�(gè)人經(jīng)驗(yàn)要是使用特異性針對(duì)AOB的探針，熒光強(qiáng)度或許沒(méi)有那么高； 2. 可能是FISH的步驟中未雜交的探針沒(méi)有有效洗脫，導(dǎo)致結(jié)果亮度過(guò)高； 3. 視野的選擇不是很好，樣品可能需要多稀釋一下； 4. 顯微鏡的對(duì)焦需要微調(diào)一下。 |
2樓2014-01-02 16:24:28
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