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1樓 2013-05-12 09:57:57

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金蟲(chóng) (小有名氣)

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wizardfan: 金幣+5, BioEPI+1, 感謝詳細(xì)的回答 2013-05-13 09:01:48
jiantunyu: 金幣+5, ★★★很有幫助, 謝謝 2013-05-13 11:13:52

樓主！你用100Da 的透析袋透析什么？蛋白嗎？你的透析袋里都有些什么？有有機(jī)物嗎？有肌氨酸鈉？有Triton X-100嗎？你的透析buffer是什么？水嗎？············你的問(wèn)題問(wèn)的·····誒�。。。�！
關(guān)鍵原因在于：透析袋里面的滲透壓大于外面！而你的透析袋體積又不夠大！

你先要明白道爾頓是什么，他其實(shí)就是表示原子質(zhì)量單位，在生物化學(xué)、分子生物學(xué)和蛋白組學(xué)中經(jīng)常用D或KD，定義為碳12原子質(zhì)量的1/12，1D＝1/N g，N為阿弗加德羅常數(shù)，其實(shí)最開(kāi)始道爾頓計(jì)算出的原子量是我們現(xiàn)在用的當(dāng)量.
分子量是沒(méi)有單位的，它是相對(duì)分子質(zhì)量，比值是固定的，用原子量算出來(lái)的。

比如你要透析掉的NaCl，它的分子量就是58.44Da！

但是你的透析袋是截留100Da分子量以上，例如假設(shè)你的要透析的樣品中含有多種有機(jī)物質(zhì)（分子量較大）！而你的透析buffer卻是ddH2O,雖然NaCl是透析出來(lái)了！但是其中的有機(jī)物質(zhì)呢�。。〔贿€在里面嗎，導(dǎo)致里面的滲透壓比外面的大，為了平衡！水就不斷進(jìn)入透析袋中！直到膨脹不能在膨脹為止，有時(shí)還會(huì)透析袋破裂！

建議：
1. 因?yàn)槟阒幻擕}！所以建議你在你的透析buffer中加入與你要透析的樣品相同的溶劑（NaCL除外）！這樣可以減小透析袋內(nèi)外滲透壓之差！
2.如果你已經(jīng)保持你的透析buffer與你要透析的樣品是相同的溶劑（NaCL除外），可能是鹽濃度太高了！那么建議你再將透析袋的長(zhǎng)度剪長(zhǎng)一點(diǎn)，10cm試試！
3.透析不一定是換buffer的最好辦法，你可以試一試脫鹽柱G25，方面，快速！

就這么多吧，希望能給你點(diǎn)幫助！
建議你一下，下次問(wèn)問(wèn)題的時(shí)候，最好將問(wèn)題闡述清楚，稀里糊涂的，別人沒(méi)辦法給你解答！

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長(zhǎng)得比我英俊的，沒(méi)我有才華！有才華的，沒(méi)我長(zhǎng)得��！

3樓2013-05-12 11:43:56

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Dionysius

木蟲(chóng) (小有名氣)

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wizardfan: 金幣+2, 鼓勵(lì)發(fā)帖交流 2013-05-13 09:02:25

在半透膜將純液體與含有溶質(zhì)的液體分開(kāi)情況下，純液體的化學(xué)勢(shì)高于含有溶質(zhì)的溶液的化學(xué)勢(shì)，而物質(zhì)移動(dòng)規(guī)律是從化學(xué)勢(shì)高移動(dòng)到化學(xué)勢(shì)低的，因此溶劑分子經(jīng)半透膜移向另外一邊的溶液。
用透析袋就是這樣，透析袋內(nèi)濃度較高，為了促使兩邊平衡，外面的水會(huì)進(jìn)入透析袋內(nèi)，里面的無(wú)機(jī)鹽也會(huì)滲透到外面。但是氯化鈉沒(méi)有顏色，你看不出來(lái)而已。

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2樓2013-05-12 11:05:07

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小毛孩24

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wizardfan: 金幣+1, 謝謝參與 2013-05-13 09:02:45

問(wèn)題不太大，透析袋沒(méi)那么弱，下次不要用這個(gè)透析袋了，記得放長(zhǎng)一點(diǎn)

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4樓2013-05-12 20:07:28

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美麗傳說(shuō)

鐵蟲(chóng) (初入文壇)

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【答案】應(yīng)助回帖

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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wizardfan: 金幣+2, 謝謝分享經(jīng)驗(yàn) 2013-05-13 09:02:54

這種現(xiàn)象很正常，可以用透析袋內(nèi)外相同的溶液進(jìn)行透析，就不會(huì)脹袋，或者你在磁力攪拌器上透析4h以上，脹袋應(yīng)該沒(méi)這么嚴(yán)重，或是透析后濃縮一下，能保證濃度

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5樓2013-05-13 08:40:14

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jiantunyu

禁蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

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6樓2013-05-13 11:18:31

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金蟲(chóng) (小有名氣)

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你的蛋白體積多少？如果量大建議你用48ml的G25脫鹽柱！

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長(zhǎng)得比我英俊的，沒(méi)我有才華！有才華的，沒(méi)我長(zhǎng)得�。�

7樓2013-05-13 11:37:37

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一般我們過(guò)分子篩蛋白的上樣量是你柱體積的0.5%~5%！這個(gè)上樣量具有較好的分離效果！

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8樓2013-05-13 12:14:26

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jiantunyu

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9樓2013-05-13 12:39:07

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引用回帖:

9樓: Originally posted by jiantunyu at 2013-05-13 12:39:07
我不是蛋白，分子量很小，上了G25脫鹽柱，基本分不開(kāi)...

1KD的東西！能告訴我是什么嗎？

1. 除鹽對(duì)于濃度應(yīng)該也是有一定的限制的，同樣的樣品鹽濃度高的自然要比濃度低的要在柱子上走的峰要寬些，相對(duì)需要的柱子的分辨率也要高點(diǎn)，但是在正常的范圍如1-2M應(yīng)該影響不大，不過(guò)要除得很干凈還是盡量少上點(diǎn)樣品，上樣的體積畢竟比濃度的影響更大。

2. 流速和柱體積都會(huì)影響你的脫鹽效果！建議選擇合適的流速！
建議選擇更長(zhǎng)的脫鹽柱！

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回復(fù)此樓

長(zhǎng)得比我英俊的，沒(méi)我有才華！有才華的，沒(méi)我長(zhǎng)得俊！

10樓2013-05-13 13:00:21

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