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微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)
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附錄 2 實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基配制 1．牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于細(xì)菌培養(yǎng)） 牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g, 水1000mL, pH7.4～7.6 2. 高氏1號(hào)培養(yǎng)基(用于放線菌培養(yǎng)) 可溶性淀粉20g , KNO3 1g, NaCl 0.5g, K2HPO4¬•3H2O 0.5g, MgSO4•7H2O 0.5g, FeSO4•7H2O 0.01g, 水1000mL, pH7.4～7.6。配制時(shí)注意，可溶性淀粉要先用冷水調(diào)勻后再加入到以上培養(yǎng)基中。 3．馬丁氏（Martin）培養(yǎng)基（用于從土壤中分離真菌）K2HPO4 1g, MgSO4•7H2O 0.5g, 蛋白胨5g, 葡萄糖10g, 1/3000孟加拉紅水溶液100mL,水900mL, 自然pH, 121℃濕熱滅菌30min. 待培養(yǎng)基融化后冷卻55～60℃時(shí)加入鏈霉素(鏈霉素含量為30μg/mL). 4. 馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA)(用于霉菌或酵母菌培養(yǎng)) 馬鈴薯(去皮)200g, 蔗糖(或葡萄糖) 20g, 水1000mL, 配制方法如下: 將馬鈴署去皮,切成約2cm2的小塊,放入1500mL的燒杯中煮沸30min, 注意用玻棒攪拌以防糊底, 然后用雙層紗布過濾, 取其濾液加糖,再補(bǔ)足至1000mL, 自然pH. 霉菌用蔗糖, 酵母菌用葡萄糖. 5. 察氏培養(yǎng)基(蔗糖硝酸鈉培養(yǎng)基)(用于霉菌培養(yǎng)) 蔗糖30g, NaNO3 2g, K2HPO4 1g, MgSO4•7H2O 0.5g, KCl 0.5g, FeSO4•7H2O 0.1g, 水1000mL, pH7.0～7.2 6. Hayflik培養(yǎng)基(用于支原體培養(yǎng)) 牛心消化液(或浸出液)1000mL,蛋白胨10g, NaCl 5g, 瓊脂15g, pH7.8～8.0, 分裝每瓶70mL, 121℃濕熱滅菌15min,待冷卻至80℃左右,每70mL中加入馬血清20mL,25%鮮酵母浸出液10mL, 15醋酸鉈水溶液2.5mL, 青霉素G鉀鹽水溶液(20萬單位以上)0.5mL, 以上混合后傾注平板. 注意:醋酸鉈是極毒的藥品,需特別注意安全操作. 7．麥?zhǔn)?McCLary)培養(yǎng)基(醋酸鈉培養(yǎng)基) 葡萄糖0.1g, KCl 0.18g，酵母膏0.25g，醋酸鈉0.82g, 瓊脂l.5g，蒸餾水l00mL。溶解后分裝試管，1l5℃濕熱滅菌15min。 8．葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基(用于V.P．反應(yīng)和甲基紅試驗(yàn)) 蛋白胨0.5g，葡萄糖0.5g，K2HPO4 0.2g，水100mL, pH7.2, 1l5℃濕熱滅菌20min。 9．蛋白胨水培養(yǎng)基(用于吲哚試驗(yàn)) 蛋白胨10g, NaCl 5g, 水1000mL，pH7.2～7.4, 121℃濕熱滅菌20min。 10．糖發(fā)酵培養(yǎng)基(用于細(xì)菌糖發(fā)酵試驗(yàn)) 蛋白胨0.2g, NaCl 0.5g, K2HPO4 0.02g，水100mL，溴麝香草酚藍(lán)(1%水溶液) 0.3mL，糖類lg。分別稱取蛋白胨和NaCl溶于熱水中，調(diào)pH至7.4，再加入溴麝香草酚藍(lán)(先用少量95%乙醇溶解后，再加水配成1%水溶液)，加入糖類，分裝試管，裝量4～5cm高，并倒放入一杜氏小管(管口向下，管內(nèi)充滿培養(yǎng)液)。115℃濕熱滅菌20min。滅菌時(shí)注意適當(dāng)延長煮沸時(shí)間，盡量把冷空氣排盡以使杜氏小管內(nèi)不殘存氣泡。常用的糖類，如葡萄糖、蔗糖、甘露糖、麥芽糖、乳糖、半乳糖等(后兩種糖的用量常加大為1.5%)。 11. RCM培養(yǎng)基(強(qiáng)化梭菌培養(yǎng)基) (用于厭氧菌培養(yǎng)) 酵母膏3g，牛肉膏l(xiāng)0g，蛋白胨10g，可溶性淀粉lg，葡萄糖5g, 半胱氨酸鹽酸鹽0.5g，NaCl 3g，NaAc 3g, 水l000mL, pH8.5，刃天青3mg/L, l2l℃濕熱滅菌30min。 12. TYA培養(yǎng)基(用于厭氧菌培養(yǎng)) 葡萄糖40g，牛肉膏2g，酵母膏2g，胰蛋白胨(bacto-typetone)6g，醋酸銨3g, KH2PO4 0.5g，MgSO4•7H2O 0.2g，F(xiàn)eSO4•7H2O 0.01g，水1000mL, pH6.5, 121℃濕熱滅菌30min。 13．玉米醪培養(yǎng)基(用于厭氧菌培養(yǎng)) 玉米粉65g，自來水1000mL，混勻，煮10min成糊狀，自然pH, 121℃濕熱滅菌30min。 14．中性紅培養(yǎng)基(用于厭氧菌培養(yǎng)) 葡萄糖40g，胰蛋白胨6g，酵母膏2g，牛肉膏2g，醋酸銨3g， KH2PO4 5g，中性紅0.2g, MgSO4•7H2O 0.2g，F(xiàn)eSO4•7H2O 0.01g, 水1000ml, pH6.2, 121℃濕熱滅菌30min。 15．CaCO3明膠麥芽汁培養(yǎng)基(用于厭氧菌培養(yǎng)) 麥芽汁(6波美)1000mL，水1000mL，CaCO310g, 明膠10g，pH6.8, 121℃濕熱滅菌30min。 16．BCG牛乳培養(yǎng)基(用于乳酸發(fā)酵)(A)溶液：脫脂乳粉100g，水500mL，加入1.6%溴甲酚綠(B.C.G)乙醇溶液1mL，80℃滅菌20min。(B)溶液：酵母膏10g，水500mL，瓊脂20g, pH6.8, 121℃濕熱滅菌20min。以無菌操作趁熱將(A)、(B)溶液混合均勻后倒平板。 17．乳酸菌培養(yǎng)基(用于乳酸發(fā)酵) 牛肉膏5g，酵母膏5g，蛋白胨10g，葡萄糖10g，乳糖5g, NaCl 5g，水1000mL, pH6.8, 121℃濕熱滅菌20min。 18．酒精發(fā)酵培養(yǎng)基(用于酒精發(fā)酵) 蔗糖10g, MgSO4•7H2O 0.5g, NH4NO3 0.5g, 20%豆芽汁2mL, KH2PO4 0.5g，水100mL，自然pH。 19. 柯索夫培養(yǎng)基(用于鉤端螺旋體培養(yǎng)) 優(yōu)質(zhì)蛋白胨0.4g, NaCl 0.7g, KCl 0.02g, Na HCO3 0.01g，CaCl 0.02g, KH2PO4 0.09g, NaH 2PO4 0.48g, 蒸餾水500 mL，無菌兔血清40mL。制法：除兔血清外的其余各成分混合，加熱溶解，調(diào)pH至7.2, 121℃濕熱滅菌20min，待冷卻后，加入無菌兔血清，制成8%血清溶液，然后分裝試管（5～10mL/管）, 56℃水浴滅活lh后備用。 20．豆芽汁培養(yǎng)基 黃豆芽500g，加水1000mL，煮沸l(wèi)h，過濾后補(bǔ)足水分，121℃濕熱滅菌后存放備用，此即為50%的豆芽汁， 用于細(xì)菌培養(yǎng)：10%豆芽汁200mL，葡萄糖(或蔗糖)50g，水800mL, pH7.2～7.4。 用于霉菌或酵母菌培養(yǎng)：10%豆芽汁200mL，糖50g，水800mL，自然pH。霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。 21．LB(Luria—Bertani) 培養(yǎng)基(細(xì)菌培養(yǎng)，常在分子生物學(xué)中應(yīng)用) 雙蒸餾水950mL，胰蛋白胨l0g, NaCl l0g，酵母提取物(bacto- yeast extract)5g，用lmol/L NaOH (約l mL) 調(diào)節(jié)pH值至7.0，加雙蒸餾水至總體積為1L，121℃濕熱滅菌30min。 含氨芐青霉素LB培養(yǎng)基:待LB培養(yǎng)基滅菌后冷至50℃左右加入抗生素，至終濃度為80～100mg/L。 22．復(fù)紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基(遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基) (用于水體中大腸菌群測(cè)定)蛋白胨10g，牛肉浸膏5g，酵母浸膏5g，瓊脂20g，乳糖10g, K2HPO4 0.5g，無水亞硫酸鈉5g, 5%堿性復(fù)紅乙醇溶液20mL，蒸餾水1000mL。 制作過程：先將蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏和瓊脂加入到900mL水中，加熱溶解，再加入K2PO4，溶解后補(bǔ)充水至l000mL，調(diào)pH至7.2～7.4。隨后加入乳糖，混勻溶解后，于115℃濕熱滅菌20min。再稱取亞硫酸鈉至一無菌空試管中，用少許無菌水使其溶解，在水浴中煮沸10min后，立即滴加于20mL 5%堿性復(fù)紅乙醇溶液中，直至深紅色轉(zhuǎn)變?yōu)榈奂t色為止。將此混合液全部加入到上述已滅菌的并仍保持融化狀態(tài)的培養(yǎng)基中，混勻后立即倒平板，待凝固后存放冰箱備用，若顏色由淡紅變?yōu)樯罴t，則不能再用。 23．乳糖蛋白胨半固體培養(yǎng)基(用于水體中大腸菌群測(cè)定) 蛋白胨10g，牛肉浸膏5g，酵母膏5g，乳糖10g，瓊脂5g，蒸餾水1000mL，pH7.2～7.4，分裝試管(l0mL/管), 115℃濕熱滅菌20min。 24．乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(用于多管發(fā)酵法檢測(cè)水體中大腸菌群)蛋白胨10g，牛肉膏3g，乳糖5g，NaCl 5g，蒸餾水l000mL，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液lmL。調(diào)pH至7.2，分裝試管(l0mL/管)，并放入倒置杜氏小管，l15℃濕熱滅菌20min。 25．三倍濃乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(用于水體中大腸菌群測(cè)定)將乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中各營養(yǎng)成分以擴(kuò)大3倍加入到l000mL水中，制法同上，分裝于放有倒置杜氏小管的試管中，每管5mL，1l5℃濕熱滅菌20min。 26．伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基(EMB培養(yǎng)基)(用于水體中大腸菌群測(cè)定和細(xì)菌轉(zhuǎn)導(dǎo)) 蛋白胨l0g, 乳糖10g, K2HPO4 2g，瓊脂25g, 2%/伊紅Y(曙紅)水溶液20mL, 0.5%美藍(lán)(亞甲藍(lán))水溶液l3mL，pH7.4。制作過程：先將蛋白胨、乳糖、K2HPO4和瓊脂混勻，加熱溶解后，調(diào)pH至7.4, 1l5℃濕熱滅菌20min，然后加入已分別滅菌的伊紅液和美藍(lán)液，充分混勻，防止產(chǎn)生氣泡。待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右倒平皿。如培養(yǎng)基太熱會(huì)產(chǎn)生過多的凝集水，可在平板凝固后倒置存于冰箱備用。在細(xì)菌轉(zhuǎn)導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中用半乳糖代替乳糖，其余成分不變。 27．加倍肉湯培養(yǎng)基(用于細(xì)菌轉(zhuǎn)導(dǎo)) 牛肉膏6g，蛋白胨20g, NaCL 10g，水1000mL, pH7.4～7.6。 28．半固體素瓊脂(用于細(xì)菌轉(zhuǎn)導(dǎo)) 瓊脂1g，水100mL, 121℃濕熱滅菌30min。 29．豆餅斜面培養(yǎng)基(用于產(chǎn)蛋白酶霉菌菌株篩選)：豆餅100g加水5～6倍，煮出濾汁100mL，汁內(nèi)加入KH2PO4 0.1%, MgSO4 0.05%, (NH4)2SO4 0.05%，可溶性淀粉2%, pH6，瓊脂2%～2.5%。 30．酪素培養(yǎng)基(用于蛋白酶菌株篩選) 分別配制A液和B液。 A液：稱取Na2HPO4•7H2O 1.07g。干酪素4g，加適量蒸餾水，并加熱溶解。 B液：稱取 KH2PO4 0.36g，加水溶解。 A、B液混合后，加入酪素水解液0.3 mL, 加瓊脂20g，最后用蒸餾水定容至1000mL。 酪素水解液的配制：1g酪蛋白溶于堿性緩沖液中，加入1%的枯草芽孢桿菌蛋白酶25mL加水至100mL, 30℃水解lh。用于配制培養(yǎng)基時(shí)，其用量為1000mL培養(yǎng)基中加入100mL以上水解液。 31．細(xì)菌基本培養(yǎng)基(用于篩選營養(yǎng)缺陷型) Na2HPO4•7H2O 1g，MgSO4•7H2O 0.2g, 葡萄糖5g, NaCl 5g, K2HPO4 lg，水l000mL, pH7.0, 1l5℃濕熱滅菌30min。 32. YEPD培養(yǎng)基(用于酵母原生質(zhì)體融合) 酵母粉10g, 蛋白胨20g，葡萄糖20g，蒸餾水1000mL, pH6.0，115℃濕熱滅菌20min。 33. YEPD高滲培養(yǎng)基(用于酵母原生質(zhì)體融合) 在YEPD培養(yǎng)基中加入0.6mol/L的NaCL, 3%瓊脂。 34. YNB基本培養(yǎng)基(用于酵母原生質(zhì)體融合) 0.67%酵母氮堿基(YNB, 不含氨基酸，Difco), 2%葡萄糖，3%瓊脂，pH6.2。另一配方為：葡萄糖10g (NH4)2SO4 1g，K2HPO4 0.125g，KHPO4 0.875g, KI 0.0001g，MgSO4•7H2O 0.5g, CaCl2•2H2O 0.lg, NaCl0.1g，維量元素母液lmL, 維生素母液lmL(母液均按常規(guī)配制)，水1000mL, pH5.8～6.0。 35. YNB高滲基本培養(yǎng)基(用于原生質(zhì)體融合) 在YNB基本培養(yǎng)基中加入0.6mol/LNaCl。 36．酚紅半固體柱狀培養(yǎng)基(用于檢查氧與菌生長的關(guān)系) 蛋白胨1g，葡萄糖10g, 玉米漿10g，瓊脂7g, 水1000mL， pH7.2。在調(diào)好pH后，加入1.6%酚紅溶液數(shù)滴，至培養(yǎng)基變?yōu)樯罴t色，分裝于大試管中，裝量約為試管高度的1/2，1l5℃滅菌20min。細(xì)菌在此培養(yǎng)基中利用葡萄糖生長產(chǎn)酸，使酚紅從紅色變成黃色，在不同部位生長的細(xì)菌，可使培養(yǎng)基的相應(yīng)部位顏色改變。但注意培養(yǎng)時(shí)間太長，酸可擴(kuò)散以致不能正確判斷結(jié)果。 以上各種培養(yǎng)基均可配制成固體或半固體狀態(tài)，只需改變瓊脂用量即可，前者為1.5%～2.0%，后者為0.3%～0.8%。 |
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豆小臣8848樓
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