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渭水凡夫

鐵蟲 (小有名氣)

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在線: 35.3小時(shí)
蟲號: 2100849
注冊: 2012-11-01
專業(yè): 生殖生物學(xué)

[交流] 分子生物學(xué)基礎(chǔ)之DNA檢測相關(guān)實(shí)驗(yàn)的溶液配制

【分享】電泳緩沖液、染料、凝膠上樣液等的配制方法
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實(shí)驗(yàn)室各種緩沖液的配方

電泳緩沖液

50×Tris-乙酸（TAE）緩沖液       終濃度配制1L溶液
成分                                        各成分的用量
2mol/L Tris堿                         242g
1mol/L 冰乙酸                         57.1 ml
EDTA （pH＝8.0）                18.622g （200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0））
水                                              補(bǔ)足1L

5×Tris-硼酸（TBE）緩沖液
成分及終濃度配制1L溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris堿                   54g
445 mmol/L 硼酸鹽                   27.5g 硼酸
10 mmol/L EDTA                      20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
水                                              補(bǔ)足1L

染料
1％溴酚藍(lán)（bromophenol blue）
加1g水溶性鈉型溴酚藍(lán)于100ml水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。

1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）
溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙錠（ethidium bromide）
小心稱取1g溴化乙錠，轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，加100ml水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于4℃貯存。

凝膠上樣液（gel loading solutions）

6×堿性凝膠上樣液（室溫貯存）
成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量
0.3 N 氫氧化鈉                                        300ul 10N 氫氧化鈉
6 mmol/L EDTA                                        120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
18％聚蔗糖（400型）                                  1.8g
0.15％溴甲酚綠                                        15mg
0.25％二甲苯青FF                                        25mg
水                                                    補(bǔ)足到10ml

6×聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）
成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚藍(lán)                         1.5ml 1％溴酚藍(lán)
0.15％二甲苯青FF                   1.5ml 1％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA                      100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
15％聚蔗糖（400型）                1.5g
水                                  補(bǔ)足到10ml

6×溴酚藍(lán)/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）
成分及終濃度                配制10ml溶液各成分用量
0.25％溴酚藍(lán)                      2.5ml 1％溴酚藍(lán)
0.25％二甲苯青FF                   2.5ml 1％二甲苯青FF
15％聚蔗糖（400型）             1.5g
水                               補(bǔ)足到10ml

6×甘油凝膠上樣液（4℃貯存）
成分及終濃度                配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚藍(lán)                                     1.5ml 1％溴酚藍(lán)
0.15％二甲苯青FF                               1.5ml 1％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA                                  100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
50％甘油                                        3ml
水                                              3.9ml

6×蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）
成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚藍(lán)                   1.5ml 1％溴酚藍(lán)
0.15％二甲苯青FF             1.5ml 1％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA                   100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
40％聚蔗糖                      4g
水                               補(bǔ)足到10ml

10×十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室溫貯存）
成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量
0.2％溴酚藍(lán)                   20mg
0.2％二甲苯青FF                20mg
200 mmol/L EDTA                4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
0.1％SDS                      100ul 10％ SDS
50％甘油                      5ml
水                            補(bǔ)足到10ml

0.5mol/L EDTA:  配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三鈉鹽�；蚍Q取186.1g的Na2EDTA"2H2O和20g的NaOH(調(diào)節(jié)pH＝8.0)，并溶于水中，定容至1L。
0.5mol/L EDTA:  配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三鈉鹽�；蚍Q取186.1g的Na2EDTA"2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/LMgCl2: 溶解20.3g MgCl2"6H2O于足量的水中，定容到100ml。
10mg/mlRnase（無DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl調(diào)pH至7.5，于-20℃貯存。（配制過程中要戴手套）

10N氫氧化鈉（NaOH）：溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。

10％SDS（十二烷基硫酸鈉）：稱取100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。

10×標(biāo)準(zhǔn)DNA連接酶緩沖液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端連接）
成分及終濃度配制10ml溶液各成分的用量
0.5mol/L Tris-HCl:5ml 1mol/L 貯液 ,100mmol/L MgCl2 : 1ml 1mol/L 貯液,100mmol/L DTT: 1ml 1mol/L 貯液,2mmol/L ATP: 200ul 100 mmol/L 貯液,5mmol/L 鹽酸亞精胺（可選）:50ul 1 mmol/L 貯液,0.5mg/ml BSA（組分V）（可選）:0.5ml 10 mg/mL 貯液 ,水: 2.25ml
將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20℃ 。

DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水
加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的體積分?jǐn)?shù)為0.1％。在37℃溫浴至少12h，然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min，以使殘余的DEPC失活。DEPC會與胺起反應(yīng)，不可用DEPC處理Tris緩沖液。

TE（用于懸浮和貯存DNA）
成分及終濃度配制100ml溶液各成分的用量
10mmol/L Tris－HCl          1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）
1mmol/L EDTA                      200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
水                                        98.8ml

Tris緩沖液（Tris-HCl buffer）
將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中，再根據(jù)所要求的pH（25℃下）加一定量的濃鹽酸（11.6N），用水調(diào)整終體積至1L。
濃鹽酸的體積（ml）                      pH
8.6                                                 9.0
14                                                    8.8
21                                                 8.6
28.5                                              8.4
38                                                 8.2
46                                                 8.0
56                                              7.8
66                                                 7.6
71.3                                           7.4
76                                              7.2

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