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求助，關(guān)于cox-2酶催化花生四烯酸的問(wèn)題
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老板的一個(gè)項(xiàng)目，其中有一部需要測(cè)定酶活。參照文獻(xiàn)，使用cox-2酶催化花生四烯酸，檢測(cè)花生四烯酸的減少量，但實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了幾十次，也調(diào)整了一些方案，一直沒(méi)有得到理想結(jié)果。花生四烯酸含量未見(jiàn)減少，只有其中3次花生四烯酸被反應(yīng)掉了。下面是我的一些步驟，請(qǐng)各位大神看下有沒(méi)有什么疏漏。 血紅素+腎上腺素+tris-HCl混勻后加入cox-2酶，常溫孵化2min。再加入aa，5% CO2 37攝氏度培養(yǎng)30min，加入HCL終止反應(yīng)。進(jìn)液相，看aa色譜峰面積的減少。 如果一直做不出結(jié)果也就罷了，可是偶爾能做出來(lái)是怎么回事~~好糾結(jié)~~拜托各位了！ |
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