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[求助]
求大神幫忙“切尾”。。
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我提的是湖底泥巴里的總DNA，但是有拖帶現(xiàn)象，，而且很嚴(yán)重，希望大神來(lái)幫忙。�？纯词鞘裁磫�(wèn)題。 實(shí)驗(yàn)方法：1）取2g土樣于7mL離心管中加入2mL裂解緩沖液（100mL of 100mM Tris-HCl［pH 8.0］，100mM EDTA［pH8.0］，1.5M NaCl）。 2）加入2g酸洗石英沙后振蕩2min，再加入0.2mL SDS（20%）繼續(xù)振蕩5sec繼而65°C溫浴1h。 3）6000r離心10min，收集上清于另一新的離心管，土壤顆粒重新懸浮于2mL裂解緩沖液65°C溫浴10min，6000r離心10min�；旌蟽纱坞x心的上清，加入一半體積的含NaCl（1.6M）的聚乙二醇（30%），室溫靜置2h。 4）10000r離心20min，棄上清，粗制核酸懸浮于0.4mL TE（10mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH8.0）。加KAc（3M）至最終濃度為0.5M，冰浴5min。 5）4°C 13000r離心30min。水相中先加入等體積的苯酚:氯仿，13000r離心10分鐘，再加入等體積苯酚:氯仿:異戊醇，13000r離心10分鐘。水相中加入0.6倍體積的異丙醇，室溫靜置2h。 5）13000r離心30min DNA沉淀，用70%乙醇13000r離心10分鐘兩次。沉淀重新懸浮于20μL TE溶液中。 拖帶問(wèn)題.png |
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lxj341401
至尊木蟲(chóng) (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
chin_jl(myprayer代發(fā)): 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，感謝你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-23 15:34:42
chin_jl: 金幣+15, ★★★很有幫助 2013-05-23 22:03:21
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| 你這電泳圖不是拖尾現(xiàn)象，拖尾應(yīng)該是靠近膠點(diǎn)樣孔位置才對(duì)，現(xiàn)在是在目的條帶的前方有熒光，說(shuō)明那些條帶比目的條帶更小，很可能是RNA污染或者DNA片段斷裂導(dǎo)致。 |
2樓2013-05-23 15:20:34
3樓2013-05-23 22:03:57
lxj341401
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