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夏天的普洱茶木蟲 (著名寫手)
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[求助]
T載體自連
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| 做藍(lán)白斑篩選的時候，空白使用不含目的片段的T載體+感受態(tài)+SOC培養(yǎng)基做的，但是每次平板里面長出來的白斑和藍(lán)斑都不少，絕大部分是藍(lán)斑。抗生素、X-GAL、IPTG都沒有問題，這是載體自連嗎？有什么方法減少載體自連的？ |
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5樓2013-05-28 08:30:24
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【答案】應(yīng)助回帖
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kx444555: 金幣+1, 鼓勵交流 2013-05-28 19:48:21
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| 藍(lán)白斑的顏色變化比菌落長得慢，你可以在轉(zhuǎn)化完了，菌長好了之后，放在四度1到2天，這樣沒來得及變成藍(lán)色的假陽性就都變成藍(lán)色了，然后你再看看效率。只要泛藍(lán)，就是藍(lán)斑，再挑白斑，成功率高點(diǎn)，如果都是藍(lán)的，那就是T載體的問題或者是你insert的問題，跑個電泳確認(rèn)一下insert的質(zhì)量，而且insert往死了多加沒事的。。。。。。。。。。。 |
9樓2013-05-28 08:49:05
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10樓2013-05-28 17:03:25
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