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[求助]
求教武漢大學的同志 關于水稻花粉RNA的提取
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關于水稻花粉RNA的提取 聽說取花粉是穿著軍大衣在-40度冰箱里！真的是這樣嗎？ 花粉量如此之少取得急死人 還請賜教如此少材料的RNA如何提取 |
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志子
至尊木蟲 (文壇精英)
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- 專業(yè): 高分子組裝與超分子結構
【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數 +1
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1.水稻單核花粉分離： 篩選好的材料剪成3~4cm長的小段，加入15%蔗糖溶液，組織破碎機打碎，依次通過150、50、30微米濾膜，15%蔗糖溶液沖洗30微米濾膜，收集膜上花粉，密度梯度離心，1000rpm 10min。吸取特點界面處花粉，2500rpm，4℃離心5min收集沉淀。 2.水稻二核花粉分離： 篩選好的花藥加入15%蔗糖溶液，玻璃棒輕搗讓花粉散出，依次通過50、30微米濾膜，15%蔗糖溶液沖洗微米濾膜，收集膜上花粉，密度梯度離心，1000rpm 10min。吸取特點界面處花粉，2000rpm，4℃離心5min收集沉淀。 3.水稻三核花粉分離： 篩選好的花藥加入45%蔗糖溶液，玻璃棒輕搗讓花粉散出，依次通過60、35微米濾膜，45%蔗糖溶液沖洗微米濾膜，收集膜上花粉，直接2500rpm，4℃離心5min收集沉淀。 4.鏡檢： lei HC顯微鏡觀測分離好的各期花粉大小、花粉壁、細胞內含物和雜質。含0.1% Triton的DAPI染色觀察細胞核，F(xiàn)DA染色觀察細胞活力。 5.RNA提�。� 分離得到的花粉用RNeasy Plant Mini Kit提取RNA，瓊脂糖凝膠電泳檢測提取的RNA。 |
亞先2樓2013-05-29 01:23:26
非常感謝 3樓2013-05-29 11:17:38
4樓2013-06-06 11:07:05
5樓2013-06-08 13:14:39
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
亞先: 金幣+7, ★有幫助 2013-08-24 13:25:15
亞先: 金幣+7, ★有幫助 2013-08-24 13:25:15
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6樓2013-08-05 11:05:43
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