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平凡卻最重要新蟲 (初入文壇)
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【求助/交流】微衛(wèi)星多態(tài)性檢測maker條帶如何優(yōu)化
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聚丙烯酰胺電泳檢測的微衛(wèi)星多態(tài)性，結(jié)果如圖：maker一直有不同程度的拖尾或者條帶過粗和模糊，影響我判讀序列長度，想把maker條帶做的更清晰，不知道該從什么地方改進？ IMG_20130517_105616.jpg |
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【答案】應(yīng)助回帖
★
kx444555: 金幣+1, 鼓勵交流 2013-06-20 22:11:27
1949stone: MolEPI+1, good 2013-06-21 08:37:39
kx444555: 金幣+1, 鼓勵交流 2013-06-20 22:11:27
1949stone: MolEPI+1, good 2013-06-21 08:37:39
| 樓主的膠品相實在不敢恭維。做膠的時候玻璃板要封好，這樣點樣孔才不會縮進去。樓主的膠下面怎么不齊啊，是后來切的嗎？如果不是，那膠要做規(guī)整一點，條帶才不會彎彎曲曲。還有電泳時緩沖液要多一點，太少的話液面不平，電場分布不均勻就會造成整體條帶“微笑”。你的MAKER拖尾，可能是因為上樣量太大或電泳電壓過高。還有銀染染色時顯色液加甲醛能讓膠的背景色變?nèi)醣阌谟^察。 |
2樓2013-06-20 20:45:06
★ ★ ★
kx444555: 金幣+1, 鼓勵交流 2013-06-20 22:11:36
1949stone: 金幣+2, 鼓勵多多交流 我也做過這個 很有感觸啊 2013-06-21 08:38:06
kx444555: 金幣+1, 鼓勵交流 2013-06-20 22:11:36
1949stone: 金幣+2, 鼓勵多多交流 我也做過這個 很有感觸啊 2013-06-21 08:38:06
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由于我做的是群體遺傳，所以要知道每個個體微衛(wèi)星的基因型，由于常規(guī)的跑膠讀不出來，所以要用毛細(xì)管電泳進行分型，對PCR產(chǎn)物的要求比較高。 但我PCR產(chǎn)物用PAGE跑膠發(fā)現(xiàn)雜帶較多，通過改變退火溫度和T-D PCR都不能有效的減少雜帶。請問有什么好的建議？ （PS：我做PCR用的是天根的 2*Taq PCR Master Mix , 10ul體系，引物0.5+0.5 ,模板1. 我的模板質(zhì)量確實不是太高，這會是主要原因嗎？） |
3樓2013-06-20 20:48:22
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4樓2014-06-25 15:04:12
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。追問：我最后是直接測序檢測的微衛(wèi)星，關(guān)于這樣做，我只找到中文的引證，直接測序檢測微衛(wèi)星到底可不可行，希望能找到sci的引證 5樓2014-06-25 15:13:54
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