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once1015木蟲 (正式寫手)
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[求助]
酶的米氏常數(shù) 和 解離常數(shù)
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我是做結構生物學的，是微生物領域的小菜，現(xiàn)在得到一個比較有意思的酶的結構。 現(xiàn)在需要補充功能性實驗。 但是因為 反應速度太快， 用雙倒數(shù)法做圖獲得的Km值 都很不穩(wěn)定。 現(xiàn)在剛好有ITC的設備， 想測量一下酶與底物的解離常數(shù) Kd， 然后用這個數(shù)據(jù) 顯示 酶與底物的親和力如何， 可以嗎？ 謝謝您的幫助！ |
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 酶工程 |
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once1015
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3樓2013-05-30 12:48:50
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【答案】應助回帖
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不穩(wěn)定，，，，，給個提示 酶促反應速度只在最初一段時間內(nèi)保持恒定，隨著反應時間的延長，酶促反應速度逐漸下降。原因有多種，如底物濃度降低，產(chǎn)物濃度增加而對酶產(chǎn)生抑制作用并加速逆反應的進行，酶在一定pH及溫度下部分失活等。因此，研究酶的活力以酶促反應的初速度為準。 為獲得準確的實驗結果，應盡量減少實驗操作中帶來的誤差。因此配制各種底物溶液時應用同一母液進行稀釋，保證底物濃度的準確性。各種試劑的加量也應準確，并嚴格控制準確的酶促反應時間。 |
2樓2013-05-30 12:02:44
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4樓2013-05-30 12:55:53
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5樓2013-07-31 14:55:29
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