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袁1231金蟲 (小有名氣)
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[求助]
NIH 3T3S 細(xì)胞Trk 受體western檢測(cè)問題
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| 大家好，我從別人那要了一株NIH-3T3S 細(xì)胞，穩(wěn)定表達(dá)Trk受體，理論上，加上BDNF就能激活受體磷酸化，但是我反復(fù)做總做不出來。第一次做的細(xì)胞，空白對(duì)照和BDNF高濃度處理的細(xì)胞裂解后跑膠，western可以看到Trk受體， 所有的空都能看到磷酸化的Trk受體 （Tyr706）.可是因?yàn)槲抑虚gstrip了好多次，導(dǎo)致我beta actin的帶有些被洗掉了，于是我用同一份細(xì)胞裂解液重做一次，可是怎么也做不出來了。細(xì)胞裂解液是放在-20保存的，一抗在牛奶里-20度保存，重復(fù)用。大家覺得是什么問題？western新手，望大家賜教。 |
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