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構(gòu)建MDCK單層細胞膜完整性的評價方法
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最近要用單層的MDCK細胞做轉(zhuǎn)運實驗，但是在查文獻的時候發(fā)現(xiàn)一般要先驗證單層膜完整性，或者說細胞融合情況。一般有三種方法：測定TEER、檢測膜兩側(cè)的堿性磷酸酶ALP活性以及測細胞旁路轉(zhuǎn)運效率（一般用熒光素鈉等細胞旁路轉(zhuǎn)運物質(zhì)）。想求助各位大俠有誰做過相關(guān)實驗，能提供一些經(jīng)驗的。 1、我最近測定的TEER值（20萬/孔種12孔transwell板，長24h，TEER值為800Ω）似乎有些高，我不確定是不是操作的問題，不知道有沒有大俠做過相關(guān)實驗可以提供些依據(jù)？ 2、用ALP試劑盒檢測細胞極性，應(yīng)該取培養(yǎng)基直接測定還是要將細胞裂解之后測細胞內(nèi)部的堿性磷酸酶活性？ 3、究竟這三種方法測定得到怎樣的結(jié)果可以說明單層細胞膜完整，可以進行轉(zhuǎn)運實驗。 4、在transwell板上進行的轉(zhuǎn)運實驗一般是半小時取樣，連續(xù)取樣3個小時，比如每次取200μl樣品進行測定（頂側(cè)500μl，底測1500μl），請問結(jié)果應(yīng)該如何計算，有沒有公認的或者通用的公式。結(jié)果應(yīng)該用折線圖表示還是只要算出表觀滲透系數(shù)Papp就可以了？ 求有做過這部分實驗的大俠幫助啊�。�！萬分感謝�。。� [ Last edited by crystalzl661 on 2013-6-5 at 13:19 ] |
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