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zmclk銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
一篇基因克隆的文章，審稿人提出這樣的問(wèn)題，請(qǐng)求大牛指點(diǎn)回答
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Without the availability of a genome, the authors cannot guarantee that the primers are gene-specific. They might amplify isoforms, close duplicates or SNP isoforms that cannot be distinguished by general qPCR. 我克隆出序列全長(zhǎng)后，設(shè)計(jì)引物做Real-time PCR，審稿人說(shuō)我的引物不是特異性的，我該怎么回答呢？ [ Last edited by zmclk on 2013-6-5 at 09:41 ] |
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stevenshi021
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審稿人問(wèn)的是你調(diào)取基因的時(shí)候使用的是PCR擴(kuò)增的方法，是在你已知基因的序列設(shè)計(jì)的。那么審稿人的顧慮或疑問(wèn)是如果是一個(gè)全新的基因，沒(méi)有可用的同源基因，那么這個(gè)方法還能就不那么通用了！所以你需要回答的是告訴審稿人你的方法是否具有一般性，還是就回答你的方法就是用來(lái)在已有一定序列信息的前提下使用的。 所以一般文章結(jié)尾不要說(shuō)太泛泛的言語(yǔ)。 |
2樓2013-06-05 10:33:07
zmclk
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3樓2013-06-05 11:27:15
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4樓2013-06-05 11:37:32
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5樓2013-06-05 12:22:21
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| 基因組未知，無(wú)法確定引物是特異的，當(dāng)進(jìn)行定量PCR的時(shí)候，不能區(qū)分isoforms, close duplicates or SNP isoforms 。這樣一來(lái)，從你的定量PCR結(jié)果無(wú)法推出可靠的結(jié)論。你要證明做定量PCR的引物是特異的，能區(qū)分SNP亞型；引物也不會(huì)擴(kuò)增 close duplicates 。 |
6樓2013-06-05 12:35:38
zmclk
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7樓2013-06-05 16:23:23
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