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liujun1102金蟲 (正式寫手)
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[求助]
關(guān)于做染色質(zhì)免疫共沉淀的幾個(gè)問(wèn)題，請(qǐng)高手賜教
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| 小弟現(xiàn)在想做染色質(zhì)免疫共沉淀，有幾個(gè)問(wèn)題。第一，用的槍頭及EP管等等需要高壓滅菌嗎？第二，TE緩沖液能用雙蒸水代替嗎？如果能代替那么雙蒸水需要滅菌嗎？ |
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bullfrog325
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
liujun1102: 金幣+10, ★★★★★最佳答案 2013-06-09 10:44:25
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滅菌是生物實(shí)驗(yàn)最基本的要求, 滅菌的同時(shí)也把可能污染的蛋白, DNA破壞掉. 公司賣的都說(shuō)他們已經(jīng)滅過(guò)菌了. 理論上你不用再做一次, 當(dāng)然如果你實(shí)驗(yàn)式里用的這些東西來(lái)自信譽(yù)可靠的公司. 第二個(gè)你是不是指最后得到的DNA? 因?yàn)槊菜浦笞詈蠹兓疍NA時(shí)用到TE. 這個(gè)不能用雙蒸水, 因?yàn)閷?duì)長(zhǎng)期保存DNA不利, 如果你擔(dān)心TE里面的EDTA會(huì)影響PCR, 你可以用10mM Tris(pH 8.0) 代替. |
2樓2013-06-05 17:29:55
liujun1102
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3樓2013-06-06 08:57:55
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4樓2013-06-06 15:52:20
liujun1102
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5樓2013-06-08 13:52:26
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6樓2013-06-08 18:27:09
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7樓2013-06-09 10:45:33
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| 需要的,內(nèi)參在各種樣品里面的作用就是確定其他DNA片段的相對(duì)含量. 不同的樣品之間只有知道了內(nèi)參的量才能比較其他的序列的含量高低. 不做input是可以的, 那么對(duì)照樣品就換成IgG或者一個(gè)完全不相干的抗體, 我個(gè)人的看法是input對(duì)照不如IgG對(duì)照好, 因?yàn)樵诔曔^(guò)后的抗體結(jié)合, 洗脫, 純化時(shí)你不知道會(huì)不會(huì)有什么無(wú)法預(yù)料因素影響最后的富集結(jié)果, 而這些實(shí)驗(yàn)差異在input里面是體現(xiàn)不出來(lái)的. |
8樓2013-06-09 20:26:51
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