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cynthia8225

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[交流] 現(xiàn)在國際上流行哪種多糖測定方法

如題，現(xiàn)在想檢測胞外多糖的含量，但是在查找文獻(xiàn)時發(fā)現(xiàn)有醇沉后用苯酚硫酸法測定的，也有直接測定EPS干重的，還有其他一些方法，可是到底哪種方法比較好呢？

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libocpu

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1樓 2013-06-06 09:26:36

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4樓: Originally posted by cynthia8225 at 2013-06-06 15:36:29
就是在沉淀胞外多糖的時候，有人要除蛋白以后再進(jìn)行測定，可是由于樣品較多，每個都透析感覺不實際。。。所以不知道怎么辦了。。。還有為什么直接測定不可能呢？...

我個人認(rèn)為，多糖本身就是個混合物，只能說大概是什么樣的~~要精確測量，必須做到：1.采用標(biāo)準(zhǔn)品為該組分多糖，分子量已知，鏈接方式已知，由多少單糖組成已知，這樣才可以；2.苯酚硫酸法是采用了葡萄糖或者其他單糖測定的，但是多糖本身的復(fù)雜性，包括多糖在酸性條件下水解后，也同樣有吸收，當(dāng)你的樣品是混合物時候，你如何確定多糖的含量？
透析也是個粗分的辦法，因為目前也沒有特別好的方法；要不然還裝柱子唄~~這個東西，反正國內(nèi)做的好的沒幾個，不是我們不努力，而是有些問題，確實存在，就不好解決。
我再提一個問題，多糖的純度如何測定？
你想清楚這個問題的話，就明白為什么多糖含量沒辦法測定了

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5樓2013-06-06 16:12:02

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12樓: Originally posted by cynthia8225 at 2013-06-07 21:45:43
正解。。。。確實如此呢。。。再請教個問題，為什么有的多糖是用水溶測定，有的是用氫氧化鈉呢？有什么說法不？我是做的靈芝多糖，所以看到很多子實體多糖測定的時候是水提，但是到菌絲階段就變成氫氧化鈉了。。。 ...

多糖分為酸性多糖與中性多糖，主要是里面可能含有糖醛酸類所致。
采用氫氧化鈉提就是最大限度提取，但是酸堿性太強(qiáng)會導(dǎo)致多糖結(jié)構(gòu)改變，我前面做分離的時候，用堿提，然后加乙酸沉淀酸性糖再分離。
這樣其實也有問題，有研究表明，酸性糖活性較好，但是我做結(jié)構(gòu)的時候分離出去了酸性糖，做的比較粗。

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cynthia8225

15樓2013-06-08 16:50:00

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xiaoxiao270: 金幣+1 2013-06-13 17:12:05

這個我覺得是看你做什么用了，側(cè)重點(diǎn)在哪里了。
如果側(cè)重于提取工藝的優(yōu)化，需要測定的樣品很多，有時候干重也可以接受，硫酸苯酚法會更理想。
如果做胞外多糖的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)研究，最好還是脫蛋白，制備精制品后，進(jìn)一步測定。
好運(yùn)！

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8樓2013-06-07 11:25:48

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PSA: 金幣+1, 謝謝 2013-06-06 15:41:36

好像沒有專門的，個人感覺苯酚硫酸就行，但是要換算，直接測定不可能~~
仔細(xì)想想問什么

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3樓2013-06-06 11:19:59

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3樓: Originally posted by 藍(lán)龍教主 at 2013-06-06 11:19:59
好像沒有專門的，個人感覺苯酚硫酸就行，但是要換算，直接測定不可能~~
仔細(xì)想想問什么

就是在沉淀胞外多糖的時候，有人要除蛋白以后再進(jìn)行測定，可是由于樣品較多，每個都透析感覺不實際。。。所以不知道怎么辦了。。。還有為什么直接測定不可能呢？

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4樓2013-06-06 15:36:29

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xiaoxiao270: 金幣+1 2013-06-13 17:12:00

一般采用縮合比色測定

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6樓2013-06-06 20:09:22

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我也快要做這個了，很快，一起交流

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7樓2013-06-07 08:28:03

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8樓: Originally posted by libocpu at 2013-06-07 11:25:48
這個我覺得是看你做什么用了，側(cè)重點(diǎn)在哪里了。
如果側(cè)重于提取工藝的優(yōu)化，需要測定的樣品很多，有時候干重也可以接受，硫酸苯酚法會更理想。
如果做胞外多糖的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)研究，最好還是脫蛋白，制備精制品后，進(jìn) ...

就是現(xiàn)在我在做基因表達(dá)對多糖產(chǎn)量是否有影響，這樣的話是否是直接稱重也可以呢？有個老師說硫酸苯酚法干擾太大了。。他們現(xiàn)在用稱重法，但是我查了些文獻(xiàn)，稱重法還不是主流，但是已經(jīng)有了。。。所以現(xiàn)在迷茫了。。。

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9樓2013-06-07 14:40:33

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5樓: Originally posted by 藍(lán)龍教主 at 2013-06-06 16:12:02
我個人認(rèn)為，多糖本身就是個混合物，只能說大概是什么樣的~~要精確測量，必須做到：1.采用標(biāo)準(zhǔn)品為該組分多糖，分子量已知，鏈接方式已知，由多少單糖組成已知，這樣才可以；2.苯酚硫酸法是采用了葡萄糖或者其他單 ...

我不是要知道多糖的組成，可能后期可能做其中單糖組分是否有變化，不過現(xiàn)在仍然處在基因表達(dá)對多糖產(chǎn)量的影響方面。。。。

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10樓2013-06-07 14:51:42

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10樓: Originally posted by cynthia8225 at 2013-06-07 14:51:42
我不是要知道多糖的組成，可能后期可能做其中單糖組分是否有變化，不過現(xiàn)在仍然處在基因表達(dá)對多糖產(chǎn)量的影響方面。。。。...

我個人覺得我們有些時候想走捷徑，結(jié)果到最后才發(fā)現(xiàn)自己認(rèn)為的捷徑不是捷徑~~
多糖含量沒有辦法直接定量，稱重，無非就是浸膏重量，本來就是很粗的方法，如何精確測定呢？

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11樓2013-06-07 15:02:25

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11樓: Originally posted by 藍(lán)龍教主 at 2013-06-07 15:02:25
我個人覺得我們有些時候想走捷徑，結(jié)果到最后才發(fā)現(xiàn)自己認(rèn)為的捷徑不是捷徑~~
多糖含量沒有辦法直接定量，稱重，無非就是浸膏重量，本來就是很粗的方法，如何精確測定呢？...

正解。。。。確實如此呢。。。再請教個問題，為什么有的多糖是用水溶測定，有的是用氫氧化鈉呢？有什么說法不？我是做的靈芝多糖，所以看到很多子實體多糖測定的時候是水提，但是到菌絲階段就變成氫氧化鈉了。。。。差距好大呀。。。。

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12樓2013-06-07 21:45:43

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sevage法除蛋白。

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13樓2013-06-08 08:39:42

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neu234

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★
cynthia8225(金幣+1): 謝謝參與

看一下這方面權(quán)威專家的文章再確定

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16樓2013-06-09 08:49:14

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15樓: Originally posted by 藍(lán)龍教主 at 2013-06-08 16:50:00
多糖分為酸性多糖與中性多糖，主要是里面可能含有糖醛酸類所致。
采用氫氧化鈉提就是最大限度提取，但是酸堿性太強(qiáng)會導(dǎo)致多糖結(jié)構(gòu)改變，我前面做分離的時候，用堿提，然后加乙酸沉淀酸性糖再分離。
這樣其實也有 ...

那堿提取的多糖是不是基本都包括了呢？其實我做的不需要這么細(xì)。。。只要能鑒定多糖產(chǎn)量的變化就可以了呢。。。呵呵

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17樓2013-06-13 17:04:34

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9樓: Originally posted by cynthia8225 at 2013-06-07 14:40:33
就是現(xiàn)在我在做基因表達(dá)對多糖產(chǎn)量是否有影響，這樣的話是否是直接稱重也可以呢？有個老師說硫酸苯酚法干擾太大了。。他們現(xiàn)在用稱重法，但是我查了些文獻(xiàn)，稱重法還不是主流，但是已經(jīng)有了。。。所以現(xiàn)在迷茫了。 ...

稱重法是計算多糖得率的，就是醇沉后的干重與原料的比值。苯酚硫酸法是測多糖的含量的，用標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖做標(biāo)準(zhǔn)曲線，紫外檢測，好像兩種方法不一樣，具體我也不是很懂，我也要快做這一方面了，還希望大家能夠提出寶貴意見！

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18樓2013-06-13 18:14:55

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19樓2013-06-13 21:10:11

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看你行不行

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引用回帖:

請問堿提多糖是酸性的還是堿性的呢？我看有的文獻(xiàn)上說堿提有助于酸性多糖的溶出，好多堿提都沒明確說明糖的酸堿性，求解！

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21樓2013-11-21 14:55:22

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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖

引用回帖:

21樓: Originally posted by 看你行不行 at 2013-11-21 14:55:22
請問堿提多糖是酸性的還是堿性的呢？我看有的文獻(xiàn)上說堿提有助于酸性多糖的溶出，好多堿提都沒明確說明糖的酸堿性，求解！...

多糖的酸堿性跟其中的糖醛酸有關(guān)，堿提的肯定是酸性跟中性的。一般都用的是氫氧化鈉溶液

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22樓2013-11-23 00:00:17

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