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發(fā)酵液除菌體后清液蛋白如何分析？
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| 酵母類發(fā)酵后，通過菌體分離，分離后發(fā)酵液很澄清，如何分析里面的蛋白成分，用什么方法或儀器設(shè)備呢？（鹽的成分比較多） |
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銅蟲 (小有名氣)
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2樓2013-06-09 11:26:16
凌波麗
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- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+2, 應(yīng)助指數(shù)+1, 很詳細(xì) 2013-06-09 21:41:18
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+2, 應(yīng)助指數(shù)+1, 很詳細(xì) 2013-06-09 21:41:18
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鹽比較多，就先用分子篩層析把鹽去掉。質(zhì)譜和二維電泳都可以高效地確定樣品中的全部或者接近全部的蛋白質(zhì)成分。質(zhì)譜可以直接測定其中的各種成分的分子量，然后從數(shù)據(jù)庫中搜索對應(yīng)的成分，不需要提純樣品！ 如果你是想針對某種蛋白質(zhì)成分研究，那么就要先提純，然后分析鑒定。 鑒定三級結(jié)構(gòu)和四級結(jié)構(gòu)，不要用晶體衍射，很多時候單晶體根就做不出來！ 一級結(jié)構(gòu)的測定我就不說了，基于Ediman降解的自動測序儀測序不難，費(fèi)用也不是很高。當(dāng)然，可以用串聯(lián)質(zhì)譜或者Ladder Sequencing的質(zhì)譜測序，如果你們真的非常有錢的話而且愿意如此去花費(fèi)的話。 首先要保證三級結(jié)構(gòu)和四級結(jié)構(gòu)的分子量與標(biāo)準(zhǔn)品一樣，可以直接用MS測定四級結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的分子量，這比用電泳和層析精確且方便。而后可以使用肽譜分析，以前酶切割走電泳，現(xiàn)在酶切后用質(zhì)譜測定各個水解片段的相對分子量是否與數(shù)據(jù)庫中的信息吻合。 而后用紅外傅里葉變換光譜測定樣品的二級結(jié)構(gòu)的種類是否符合標(biāo)準(zhǔn)品，再用對比兩者的紫外光譜和熒光光譜，大致可以比較出兩者的三級結(jié)構(gòu)是否相同。有條件的話，可以用圓二色光譜比較樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的典型的二級結(jié)構(gòu)的數(shù)量的比例是否形同，需要相應(yīng)的軟件處理圓二色光譜數(shù)據(jù)。 做完以上工作后，在保證了分子量相同的前提下，最簡單的三級結(jié)構(gòu)和四級結(jié)構(gòu)的鑒定方法就是測定蛋白質(zhì)的功能，如果功能活性很強(qiáng)，那么綜合前面的信息蛋白質(zhì)很可能就是目的蛋白質(zhì)。 |
3樓2013-06-09 21:31:50
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