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hedyzero鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
乳酸乳球菌提出來的質(zhì)粒電泳后位置不對，酶切后完全消失！
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最近實(shí)驗(yàn)很是不順，各位大蝦幫忙分析下！ 做乳酸菌的轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)完以后挑克隆菌液過夜培養(yǎng)后PCR鑒定，有很亮的目的條帶，當(dāng)時想著轉(zhuǎn)進(jìn)去了，剛好保菌，雅安地震就直接回家了。五一回來后重新復(fù)蘇，但是用菌液PCR時目的條帶變得很弱。覺得不對，就又重新涂的板子，雖然長的菌很多，但是顏色都沒變（陽性應(yīng)該變黃色），就一度認(rèn)為是沒轉(zhuǎn)進(jìn)去！后來又重新做感受態(tài)電轉(zhuǎn)了幾次都沒能成功，一直到現(xiàn)在都快兩個月了，急死了快。。 昨天重新把過夜菌液PCR鑒定了次，跟地震回來的情況一樣，也是條帶很弱。今天就提質(zhì)粒準(zhǔn)備酶切鑒定。質(zhì)粒提出來跑電泳的時候，發(fā)現(xiàn)雖然有條帶但是位置不對，載體加目的片段總共3000多點(diǎn)，但是質(zhì)粒的位置比4500的marker還高。接著就直接酶切了，電泳時候發(fā)現(xiàn)完全沒有了條帶，而且把昨天的PCR鑒定也一起跑，加的量是昨天的三倍，但是條帶還沒有昨天的亮�。�！真的很詭異！�。。� 這種狀況是怎么個意思��？大家賜教�。。。。� |
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