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關(guān)于“CHO 細(xì)胞培養(yǎng)過程中乳酸的生成”問題
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在CHO細(xì)胞培養(yǎng)過程中，一般在對數(shù)生長期乳酸快速累積，進(jìn)入穩(wěn)定期后其濃度基本不再增加，而我們所做結(jié)果是后期乳酸依然在增加，而且增加的不少，除了我想到的培養(yǎng)中后期適當(dāng)增加攪拌速度與降低葡萄糖的維持水平，改變接種密度，還有什么辦法可以做到穩(wěn)定期乳酸濃度不在增加的效果。 另如何能做到將乳酸作為中間產(chǎn)物進(jìn)行代謝這一理想狀態(tài) |
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根據(jù)我的工作經(jīng)驗(yàn)，一般在穩(wěn)定期乳酸代謝可以通過流加營養(yǎng)物質(zhì)和加大通氣量的方式來維持平衡。保持細(xì)胞密度在一定范圍內(nèi)，不要過高，產(chǎn)乳酸的量就穩(wěn)定了。 至于第二個(gè)問題，我想可能需要對細(xì)胞代謝途徑進(jìn)行優(yōu)化才可以解決。目前我們公司使用的CHO細(xì)胞，產(chǎn)的乳酸還不能作為中間產(chǎn)物進(jìn)行代謝。因?yàn)槲覀兞骷訝I養(yǎng)物質(zhì)了，沒有構(gòu)建營養(yǎng)缺陷型的細(xì)胞株。實(shí)際生產(chǎn)中也不需要這樣的細(xì)胞株，因?yàn)楫a(chǎn)物量會(huì)低。 |
2樓2013-06-20 10:08:43
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3樓2013-06-20 11:02:02
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流加的是適于表達(dá)的營養(yǎng)物質(zhì)。如果流加的是細(xì)胞生長的培養(yǎng)基，那么表達(dá)量不能達(dá)到要求。在獲得一定量的細(xì)胞后，就開始流加營養(yǎng)物質(zhì)，帶走代謝產(chǎn)物了。細(xì)胞生長的培養(yǎng)基是分兩批加入的，不流加。 你說的這個(gè)現(xiàn)象，是不是可以理解為你的細(xì)胞在培養(yǎng)中后期，由于乳酸的積累和營養(yǎng)物質(zhì)的缺乏，逐漸適應(yīng)環(huán)境，利用乳酸來進(jìn)行代謝，表達(dá)產(chǎn)物。如果是這樣的話，你的產(chǎn)物表達(dá)路線中，乳酸可能是另一條途徑，可以適當(dāng)研究一下乳酸濃度和表達(dá)量的關(guān)系，說不定可以優(yōu)化培養(yǎng)工藝。 |
4樓2013-06-20 11:20:05
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明白了，謝謝。 另外想問一下您所說的“細(xì)胞生長的培養(yǎng)基是分兩批添加”，那兩次補(bǔ)加的時(shí)機(jī)和補(bǔ)加量按什么標(biāo)準(zhǔn)定？ |
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隨時(shí)領(lǐng)金幣5樓2013-06-20 12:03:45
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6樓2013-06-20 14:31:44
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| 分兩批添加的時(shí)機(jī)是根據(jù)細(xì)胞生產(chǎn)曲線，在進(jìn)入穩(wěn)定期后添加，添加的量以細(xì)胞密度為標(biāo)準(zhǔn)，即稀釋到對數(shù)期細(xì)胞密度以下。舉個(gè)例子來說吧，CHO細(xì)胞的對數(shù)期細(xì)胞密度為2~4×10的6次，那么，我在10×10的6次時(shí)添加第一次，稀釋到這個(gè)值，讓他長到10×10的6次，再加培養(yǎng)基稀釋。這樣，可以獲得始終處于對數(shù)期的細(xì)胞。當(dāng)然，具體的添加時(shí)機(jī)和添加量還是需要通過實(shí)驗(yàn)來確定的。 |
8樓2013-06-20 16:01:12
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