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阿凡的小開

金蟲 (小有名氣)

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專業(yè): 發(fā)育生物學(xué)

[求助] 有關(guān)凝膠過濾的一小段英語，求大師幫忙。

（1）Poor resolution
Cause: Bed not well packed
Recommended change: Check the efficiency. Re-pack if necessary.
Always check the efficiency of a new column, especially one that has been packed in the lab, before using it for critical applications. Cause: Bed contaminated with lipids, denatured protein etc.
   Recommended change: Clean the column as recommended.
If the column is used with rather crude samples there is always as risk that contaminants will build up. Protocols for cleaning columns are usually given in the instructions supplied with the column or gel medium.
Poor yields
Cause: Bed contaminated with lipids, denatured protein etc.
   Recommended change: Clean the column as recommended.
Tip: Prevent microbial growth by running eluent slowly through the column when it is not being used. If the column will be out of use for more than a few days, clean it well and keep it in a refrigerator or cold room.
Cause: Ionic aggregates and complexes due to carbohydrate chains (glycoproteins).
   Recommended change: Include 150mM NaCl or up to 10% betaine in buffer.
Cause: Complexes associated via SH-groups.
   Recommended change: Add reducing agent (e.g. DTT) to buffer.
Cause: Hydrophobic aggregates.
   Recommended change: Add 10-20% ethanol or other organic solvents to buffer.
Cause: Gel filtration of micelles/protein aggregates.
   Recommended change: Decrease buffer detergent concentration until below CMC or use a different detergent (stay below its CMC).Remember to check that your sample and your column are stable in the buffer before using special additives to aid solubilisation.
Cause: Digestion by proteases.
   Recommended Change: Add protease inhibitors to buffer.
Cause: Hydrophobic adsorption.
   Recommended Change: Add 10-20% ethanol or other organic solvents to buffer or decrease salt concentration in high ionic strength buffer.
Cause: Ionic adsorption due to negatively charged groups
on the support (Carboxyl-, Sulphate-) and positively charged
groups on sample molecules.
   Recommended Change: Include 150mM NaCl (or other salt) in buffer.
TIP: Be sure that your sample is stable in the buffer additive prior to use.  Some additives recommended here may denature or otherwise inactivate a protein.
TIP: Be sure your column and system are stable in the buffer additive prior to use.

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1樓 2013-06-23 20:16:58

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iwolfman

鐵蟲 (正式寫手)

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
阿凡的小開: 金幣+10, 翻譯EPI+1, ★★★很有幫助, 還行吧，謝謝 2013-07-18 17:52:05

（1）低分辨率
原因：床未填充好
推薦改變：檢測效率，充填（如需）。
總是檢測新柱的效率，尤其是在實驗室填充的柱，在重要應(yīng)用使用前要檢測。
原因：床被脂類、變質(zhì)蛋白質(zhì)等污染。
推薦改變：清理柱如推薦所示。
如果柱中用了非常粗（純度低）的樣品，那么被污染的風(fēng)險就會很高。柱或凝膠介質(zhì)的說明中通常給出

了清理柱的介紹協(xié)議。

（2）低產(chǎn)率
原因：床被脂類或變形蛋白等污染。
推薦改變：清理柱如推薦所示。
提示：柱使不使用時，緩慢的進（通入/運行）洗滌液來組織微生物生長。如果柱要隔好多天才用，要

把它洗凈點，保存在冰箱或冷室內(nèi)。
原因：碳水化合物（糖蛋白）導(dǎo)致的離子聚合物和復(fù)合物。
推薦變化：想緩沖液中注入150mM的氯化鈉或高達10%的三甲銨乙內(nèi)酯。
原因：通過SH-群結(jié)合的復(fù)合物
推薦變化：增加還原劑（DTT等）到緩沖液中。
原因：疏水性聚合物
推薦變化：增加10%到20%乙醇或其他有機溶劑到緩沖器中。
原因：微膠�；虻鞍拙酆衔锏哪z過濾。
推薦變化：降低緩沖液中清潔劑濃度，直到低于CMC或使用不同清潔劑（扔停留低于它的CMC）。在使用特定添加劑來增加溶液化前，記得檢查緩沖溶液中的樣品和你的柱在緩沖器前穩(wěn)定性。
原因：蛋白酶消化
推薦變化：向緩沖液中增加蛋白酶抑制劑。
原因：疏水性吸附
推薦改變：在高例子強度緩沖器中，增加10%-20%乙醇或其他有機溶劑到緩沖器中，或減少鹽濃度。
原因：基體上（羧基-，硫酸鹽-）的負電荷群和樣品分子上的正電荷導(dǎo)致的離子吸附。
推薦改變：向緩沖液中加入150mM氯化鈉或其他鹽。
提示：確定你的樣品在使用前在緩沖液添加劑中是穩(wěn)定的。一些推薦的添加劑可能會變性或使一個蛋白質(zhì)失活。
提示：確定你的柱和系統(tǒng)在使用前在緩沖液添加劑中是穩(wěn)定的。

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2樓2013-06-24 14:54:16

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