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happynie木蟲 (正式寫手)
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[求助]
弱弱的問下TTC定量測種子活力
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| TTC法其中有一步是：將樣品倒入研缽，加少許分析純石英砂及丙酮，充分研碎，把研磨液全部倒入容量瓶中，再用丙酮沖洗研缽2~3次，并倒入容量瓶。這個里面丙酮的作用是什么？可以用乙醇替換不？ |
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2樓2013-08-21 16:20:17
【答案】應(yīng)助回帖
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happynie: 金幣+29, ★★★很有幫助, 都給你了 2013-08-21 16:28:49
happynie: 金幣+29, ★★★很有幫助, 都給你了 2013-08-21 16:28:49
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三. 實驗設(shè)備及藥品 1．紫外-可見光分光光度計、分析天平、50mL棕色容量瓶、50mL三角瓶、比色皿 2．4mg/mL的TTC溶液：取400mg TTC（2，3，5-氯化三苯基四氮唑，分析純）和2g葡萄糖(0.1mol/L)分析純?nèi)苡谏倭空麴s水中，再稀釋到100mL的容量瓶中，貯存于棕色瓶中， 一周更換一次。 3. Tris-HCl緩沖液（pH=8.4）：稱取6.037g Tris（三羥甲基氨基甲烷，分析純），再加入20ml 1mol/L的鹽酸，再定容至1L。 4. 10%硫化鈉：稱取10gNa2S（分析純），定容到100mL的容量瓶中。 5. 無氧水：0.36g亞硫酸鈉定容到100ml容量瓶中。 四. 實驗步驟 1．標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 ⑴ 不同濃度的TTC系列溶液的配置：從TTC溶液中移取1，2，3，4，5，6，7mL放入七個50mL的容量瓶中，定容到50mL。 ⑵ 取7支試管，分別加入2mL Tris-HCl緩沖溶液、2mL無氧水、2mL不同濃度的TTC溶液,第八支為對照組。每支試管各加入1mL 10% Na2S溶液混合，搖勻，放置20min，使TTC全部還原成紅色的TF。各管加入5mL氯仿，振蕩搖勻以提取TF，穩(wěn)定數(shù)分鐘。取下層的氯仿溶液在分光光度計上，波長485nm比色。并作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。 2. 土壤中微生物的脫氫酶活性測定 ⑴ 取待測土樣2g于50mL三角瓶中，接種于20ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，放少許滅菌后的玻璃珠，放入搖床震蕩2h。 ⑵ 將土壤混合液全部轉(zhuǎn)入離心管離心，3000rpm，15min，取出離心管，將上清液倒入50mL容量瓶中，再用純水離心洗滌三遍，上清液均倒入50mL容量瓶中，洗滌后沉淀 用純水稀釋并轉(zhuǎn)移至另一50mL容量瓶中，分別定容 ⑶ 從兩個容量瓶中各分取5mL混合液，分別加入5mLTris-HCl緩沖溶液5mL蒸餾水及10mL TTC溶液；同時從每個容量瓶中分別吸取5mL混合液，加入5mLTris-HCl緩沖溶液5mL蒸餾水及10mL TTC溶液，再加入0.5mL甲醛固定以作樣品空白；將空白與待測樣品分別在37°C下振蕩培養(yǎng)30min，然后向管內(nèi)加入2mL硫酸終止酶反應(yīng) ⑷ 向樣品培養(yǎng)液及空白對照管內(nèi)各加入5mL氯仿萃取TF10min，3000r/min離心5min后取氯仿溶液，于波長485nm的進行比色，記錄吸光值，根據(jù)樣品顯色液與樣品空白的吸光值的差，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，進而得出脫氫酶的活性。 ⑸ 對比以上清液和離心沉淀分別測得的吸光度值，確定土壤脫氫酶活性測定的取樣點。并確定以后的標(biāo)準(zhǔn)方法 五. 實驗結(jié)果分析和思考題 脫氫酶活性可按下式進行計算： TF=25*(1+θm)*A*B 單位：g/g干土 其中：25為換算常數(shù) θm為土壤質(zhì)量含水率 A為標(biāo)準(zhǔn)曲線上的計數(shù) B為培養(yǎng)時間校正值，即反應(yīng)時間除以60分鐘  |
3樓2013-08-21 16:23:06
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