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wuyuanqing金蟲 (正式寫手)
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[求助]
反轉(zhuǎn)錄PCR
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| 本人小碩一枚，今年畢業(yè)在某科研單位工作，現(xiàn)在做的項(xiàng)目是異源表達(dá)某人源的蛋白和短肽，編碼蛋白的基因長度均在4.4kb左右，GC含量均在66%左右，短肽長159bp，我做了數(shù)次反轉(zhuǎn)錄PCR，合成cDNA后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，優(yōu)化了擴(kuò)增的溫度，延伸時間、添加甘油及DMSO等，總是擴(kuò)增不出來目的基因，即使有PCR產(chǎn)物也在1kb一下，不知道是為什么？是酶的問題嗎？我用的是全式金快酶pfu，合成cDNA后擴(kuò)增內(nèi)參基因沒有任何問題。請高人指點(diǎn)。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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GC含量有點(diǎn)高~給你推薦下閱微基因的復(fù)雜模版的2G Robust酶. 你可以打010-82162711找他們要個試用裝。 |
wuyuanqing
2樓2013-07-15 16:05:13
wuyuanqing
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3樓2013-07-15 16:16:14
cicelyzh
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 我覺得可能是你的RNA樣品中的基因組DNA沒有消化干凈，設(shè)計(jì)的引物跨內(nèi)含子，所以P出來的片段比預(yù)期的大。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
4樓2013-07-16 01:29:54
wuyuanqing
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5樓2013-07-16 08:18:47
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6樓2013-07-16 11:36:51
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