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dongyan08木蟲 (正式寫手)
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[求助]
pPICZαC質(zhì)粒抽提濃度低
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請問pPICZαC質(zhì)粒是低拷貝還是高拷貝質(zhì)粒？我抽了三次質(zhì)粒濃度都比較低，在0.5-1.0ug/ml，用質(zhì)粒轉(zhuǎn)了下轉(zhuǎn)化，挑了克隆，重新抽提還是比較低，抽其他的都抽得挺好的，3ug/ml以上，所以想問下什么原因抽的濃度那么低呢？會(huì)不會(huì)是它拷貝低，我搖菌時(shí)間8個(gè)小時(shí)，導(dǎo)致抽不高濃度呢？麻煩有關(guān)經(jīng)驗(yàn)的指導(dǎo)指導(dǎo)，謝謝！ [ Last edited by dongyan08 on 2013-7-16 at 21:26 ] |
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xuyihui2001
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
dongyan08(gyesang代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助！ 2013-07-19 00:34:35
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dongyan08(gyesang代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助！ 2013-07-19 00:34:35
| 建議你測個(gè)序，也許基因突變了!因?yàn)榇竽c桿菌中的質(zhì)粒片段有時(shí)候會(huì)被附近的Amp等的啟動(dòng)子啟動(dòng)，少量表達(dá)，這樣如果該片段對(duì)大腸桿菌有毒，就可能導(dǎo)致質(zhì)粒拷貝數(shù)低！也就是說，你之前沒有拷貝數(shù)第的原因，之后又有，那么從這方面的思路看來，可能是多次傳代導(dǎo)致突變了。一般擴(kuò)增質(zhì)粒用JM109，或TOP10，質(zhì)粒保守性強(qiáng)些。 |
5樓2013-07-17 08:02:44
2樓2013-07-16 22:06:51
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
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3樓2013-07-17 03:55:00
dongyan08
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4樓2013-07-17 07:51:40
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