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小瞎子

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10樓: Originally posted by hyc_charles at 2013-07-22 18:31:35
你們實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有成像系統(tǒng)嗎，建議你用成像系統(tǒng)拍照后，標(biāo)注好marker和輔助線，我們才好幫你分析。因?yàn)榭床磺宄�，只能看到最下端有些條帶，看位置，估計(jì)是引物二聚體，貌似沒(méi)什么條帶

謝謝。嗯，最近我們那個(gè)儀器壞了，新的還沒(méi)有買(mǎi)回來(lái)，所以只能用簡(jiǎn)易的自己照下來(lái)了。

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rover

11樓2013-07-22 19:12:16

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Sthunder

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

9樓: Originally posted by 小瞎子 at 2013-07-22 15:35:51

謝謝，那倆個(gè)是師姐畢業(yè)前提的，應(yīng)該是吧。師姐說(shuō)pcr后的目的條帶大概是400bp，我應(yīng)該也是。退火溫度我們是55度。
94 5min
94 30s
55 30s
72 1min
72 10min
循環(huán)35次
4 無(wú)限
一般情 ...

大家好像都喜歡預(yù)變形 5min，個(gè)人覺(jué)得實(shí)在沒(méi)必要，浪費(fèi)時(shí)間而且損酶活（除非你的taq是熱啟動(dòng)），一般用gDNA為模板 2min，質(zhì)粒 1min，cDNA 40s足以！

用trizol的時(shí)候，不管是組織還是細(xì)胞，我從來(lái)不用顯微鏡檢驗(yàn)，因?yàn)閠rizol已經(jīng)很厲害了，而且如果你提取的樣品是組織或者菌絲什么的，都是經(jīng)過(guò)液氮研磨后再用trizol處理。跑膠的話(huà)1.5是沒(méi)有問(wèn)題的，只要能看到3條帶，即使2條帶的mRNA都可以用來(lái)反轉(zhuǎn)錄！good luck

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互助互勵(lì)，共奮共進(jìn)��！

12樓2013-07-23 00:35:35

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引用回帖:

12樓: Originally posted by Sthunder at 2013-07-23 00:35:35
大家好像都喜歡預(yù)變形 5min，個(gè)人覺(jué)得實(shí)在沒(méi)必要，浪費(fèi)時(shí)間而且損酶活（除非你的taq是熱啟動(dòng)），一般用gDNA為模板 2min，質(zhì)粒 1min，cDNA 40s足以！

用trizol的時(shí)候，不管是組織還是細(xì)胞，我從來(lái)不用顯微鏡檢驗(yàn) ...

嗯，謝謝你的指點(diǎn)，今天準(zhǔn)備再做一下，看看結(jié)果如何，

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rover

13樓2013-07-23 08:34:21

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14樓2013-07-24 15:15:54

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非常感謝各位，我把這次提rna后，反轉(zhuǎn)錄，pcr后的電泳圖給大家看看，貌似是提出來(lái)了。

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rover

15樓2013-07-24 15:20:46

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這個(gè)是圖：

第三次細(xì)胞1.jpg

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16樓2013-07-24 15:22:31

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不知道怎么傳出來(lái)看不到圖片，再試試

第三次細(xì)胞.jpg

第三次細(xì)胞1.jpg

第三次細(xì)胞2.jpg

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rover

17樓2013-07-24 15:24:21

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謝謝，不好意思

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附件 1 : 第三次細(xì)胞.jpg

2013-07-24 15:26:38, 45.99 K

rover

18樓2013-07-24 15:26:54

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這次怎么沒(méi)人回答我啊

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19樓2013-07-26 09:03:51

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huayueyang

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【答案】應(yīng)助回帖

不要再用致癌物DEPC了，早該用其無(wú)毒替代品，外源RNA酶清除劑。

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堅(jiān)持！

20樓2013-08-04 00:06:18

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