 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 1391 | 回復(fù): 19 | |||
[求助]
PCR
|
|
親們，最近在細(xì)胞中提取RNA,然后反轉(zhuǎn)錄，PCR，跑膠，遇到很多問題，想和各位大俠交流一下，不勝感激。 1.配置好的depc水泡過槍頭后是不是就不能用了，是一次性的嗎？ 2.直接用trizol加入到培養(yǎng)瓶中，感覺吹打半天，放置5分鐘后顯微鏡下看細(xì)胞還是很多貼壁，是不是還要繼續(xù)吹打啊，到底要什么細(xì)胞形態(tài)才是裂解好啊？ 3.pcr用的act作上引和下引，目的條帶應(yīng)該是哪個(gè)啊，我不太清楚？ 4.下面是我做的一些pcr電泳圖，請(qǐng)大家?guī)臀铱纯�，是不是沒結(jié)果啊？  謝謝，謝謝啊 55℃PCR.jpg 45℃PCR.jpg IMG_20130712_205646.jpg IMG_20130712_205711.jpg [ Last edited by 1949stone on 2013-7-22 at 16:37 ] |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 實(shí)驗(yàn)求助 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有286人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
loveskyzhou
鐵蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 42 (小學(xué)生)
- 金幣: 43.2
- 散金: 1025
- 紅花: 4
- 帖子: 316
- 在線: 49.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 1346820
- 注冊(cè): 2011-07-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 腫瘤生物治療
2樓2013-07-19 10:48:18
3樓2013-07-19 10:56:16
loveskyzhou
鐵蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 42 (小學(xué)生)
- 金幣: 43.2
- 散金: 1025
- 紅花: 4
- 帖子: 316
- 在線: 49.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 1346820
- 注冊(cè): 2011-07-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 腫瘤生物治療
4樓2013-07-19 16:22:48
5樓2013-07-20 08:49:41
孫啟亮
金蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 6
- 應(yīng)助: 121 (高中生)
- 貴賓: 0.216
- 金幣: 2881.3
- 散金: 2546
- 紅花: 23
- 沙發(fā): 19
- 帖子: 2792
- 在線: 677.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 1112263
- 注冊(cè): 2010-10-01
- 性別: GG
- 專業(yè): 前寒武紀(jì)地質(zhì)學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小瞎子(gyesang代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-07-20 12:07:00
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小瞎子(gyesang代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-07-20 12:07:00
|
致樓主： 首先你的膠咋這樣？溴化乙錠加多了吧 感覺你所有的引物都有問題，看引物濃度是不是太高才形成了那么多非特異擴(kuò)增，若不是，建議重新設(shè)計(jì)引物。 樓主的操作應(yīng)該不是很熟練，不知RNA質(zhì)量如何，你說的trizol法提RNA不知所用試劑購自哪里，若是inviitrigen的，裂解時(shí)間較長，大約15min左右。 提取的RNA要有質(zhì)量驗(yàn)證才能反轉(zhuǎn)錄定量。 無酶水被污染后就不能用了 第一個(gè)圖中中間那條帶有可能是目的條帶，但跑的不太好，所以無法確定你的引物是否能用，確定目的條帶的方法就是看marker了，將目的條帶大小與marker對(duì)應(yīng)。 祝樓主實(shí)驗(yàn)順利 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
6樓2013-07-20 11:03:06
送紅花一朵 |
嗯，我是剛開始做的，很不熟練啊，而且會(huì)的師姐畢業(yè)了，  染色我們都是跑完膠在那個(gè)溴化乙錠溶液中泡10-15分鐘，可能放的時(shí)間長了。trizol是天根的。我是要從組織中提rna，結(jié)果提了一次沒有提出來，老師讓我先從細(xì)胞中提取練習(xí)。我從小的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中提rna，查的網(wǎng)上說10平厘米左右加1mltrizol，我就算著加了2ml，吹打時(shí)其實(shí)發(fā)現(xiàn)很多細(xì)胞并沒有下來。收集細(xì)胞應(yīng)該比較少，提完rna沒有定量，就按師姐的以前的量反轉(zhuǎn)錄了，最后pcr沒有目的條帶。那倆跑出來的是師姐以前提的rna反轉(zhuǎn)錄出的cdna，我的沒有。pcr，單位微升dd水 18.25 10x buffer 2.5 dNTP 2 上引和下引 各0.5（act-u act-d） cDNA 1 taq 0.3 謝謝你，能指點(diǎn)的幫忙指點(diǎn)下。  |
7樓2013-07-22 09:02:49
Sthunder
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 130 (高中生)
- 金幣: 2337.8
- 散金: 15
- 紅花: 9
- 帖子: 308
- 在線: 176.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 2551016
- 注冊(cè): 2013-07-17
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
小瞎子(gyesang代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-07-22 12:57:53
小瞎子: 金幣+2, ★有幫助 2013-07-24 08:41:43
小瞎子(gyesang代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-07-22 12:57:53
小瞎子: 金幣+2, ★有幫助 2013-07-24 08:41:43
|
1.配置好的depc水泡過槍頭后是不是就不能用了，是一次性的嗎？ DEPC水可以重復(fù)使用哈！ 2.直接用trizol加入到培養(yǎng)瓶中，感覺吹打半天，放置5分鐘后顯微鏡下看細(xì)胞還是很多貼壁，是不是還要繼續(xù)吹打啊，到底要什么細(xì)胞形態(tài)才是裂解好��？ trizol腐蝕性很強(qiáng)，加入后立即吹打（持續(xù)1 min足以），然后靜止15 min，一般情況想你可以看到管子里沒有明顯組織。但這不重要，得到rna后跑個(gè)膠，看下帶型就ok 3.pcr用的act作上引和下引，目的條帶應(yīng)該是哪個(gè)啊，我不太清楚？ act是常用的看家基因，但不知道你選用的引物具體設(shè)計(jì)在什么位點(diǎn)，一般我們都不擴(kuò)全長。 4.下面是我做的一些pcr電泳圖，請(qǐng)大家?guī)臀铱纯�，是不是沒結(jié)果��？ 明顯的那兩個(gè)帶不知道是否是你的act，如果是的話，你的模板應(yīng)該沒有問題。但你選用的pcr退火溫度蠻低，而且結(jié)果很彌散，根本沒明帶，所以建議拔高溫度試試看。 good luck |
8樓2013-07-22 10:51:20
9樓2013-07-22 15:35:51
hyc_charles
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 611.7
- 紅花: 3
- 帖子: 77
- 在線: 13.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 2469166
- 注冊(cè): 2013-05-17
- 專業(yè): 作物種質(zhì)資源與遺傳育種學(xué)
10樓2013-07-22 18:31:35
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 小瞎子 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 306求調(diào)劑 +9 | chuanzhu川燭 2026-03-18 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 352求調(diào)劑 +3 | 大米飯！ 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +4 | plum李子 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +6 | ytter 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
[考研] 0856材料專碩353求調(diào)劑 +4 | NIFFFfff 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 +5 | @taotao 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | 要好好無聊 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 13341 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)學(xué)碩080502 337求調(diào)劑-一志愿華中科技大學(xué) +4 | 順順順mr 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +3 | Jack?k?y 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿重慶大學(xué)085700資源與環(huán)境專碩，總分308求調(diào)劑 +3 | 墨墨漠 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交大，求調(diào)劑 +5 | 材化逐夢人 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料專碩英一數(shù)二306 +7 | z1z2z3879 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 南京大學(xué)化學(xué)376求調(diào)劑 +3 | hisfailed 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +9 | 何潤采123 2026-03-18 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +16 | 于海海海海 2026-03-19 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +9 | 想上學(xué)吖吖 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | @taotao 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 【同濟(jì)軟件】軟件（085405）考研求調(diào)劑 +3 | 2026eternal 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 26博士申請(qǐng) +3 | 1042136743 2026-03-17 | 3/150 |
|