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老夏853鐵桿木蟲 (著名寫手)
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[求助]
ITS 構(gòu)建克隆文庫
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小弟最近遇見一件怪事。。。 從某種樣品中使用its1f 和its4r 擴增到 its 序列后 ，擬構(gòu)建文庫，PCR產(chǎn)物割膠的時候條帶正常，亮度不弱。沒有什么異常現(xiàn)象。但是克隆后在平板上長相也正常 ， 做PCR 驗證的時候卻陽性率很低 ，四個樣品分別挑八個 也就只有四個是陽性的。。。 按理說這個很簡單 ，試過好幾次了 都這樣。煩死了塊。。。 ITS 序列 在大腸桿菌質(zhì)粒中表達 應(yīng)該不存在什么問題吧 ，也有陽性存在，說明不是檢驗PCR的問題。。 這么簡單一個事情 拖了一個月了 擦 。 都覺得被人質(zhì)疑能力了。，。 請有經(jīng)驗的 幫忙指點一二。。 感受態(tài)細胞 用的是bl21 ，原來一直用DH5a 的 最近一段沒了，就是有個師妹做表達 的感受態(tài) 借來用 不知道是不是這個原因。 但是 其他的樣品一切正常啊 難道是這組樣品的問題？ 在核酸水平上序列差異應(yīng)該不是問題吧？ 抑郁了都。 [ Last edited by 老夏853 on 2013-7-19 at 14:04 ] |
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4樓2013-08-06 21:40:09
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