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pjy284548878新蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
從麻風(fēng)果果仁中提取粗蛋白的實(shí)驗(yàn)
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1 稱(chēng)取500 g 麻瘋果果仁研碎放于2000 mL 錐形瓶，加入1000 mL PBS緩沖液浸漬放于恒溫震蕩器4 ℃以轉(zhuǎn)速200 rpm提取24小時(shí)。后取出以紗布粗過(guò)濾得濾液，再將濾液放于高速冷凍離心機(jī)以4 ℃、16000 rpm離心20分鐘，取上清液合并，棄去沉淀。上清液使用 密理博超濾機(jī) 超濾除去小分子雜質(zhì)得到濃縮大分子總提物 2用鹽析提純 配95%飽和的硫酸銨溶液，將0.05 M 的pH=9.0的Tris-HCl緩沖液加入到濃縮蛋白粗提液并調(diào)節(jié)其濃度，使得蛋白質(zhì)濃度大約為25~30 mg/mL，( 怎么可以觀察到蛋白質(zhì)的濃度以便調(diào)節(jié)？)使用氨水調(diào)節(jié)pH=9.0。逐步滴加95%飽和硫酸銨溶液，并不斷攪拌，至飽和，樣品放于4 ℃冷卻3小時(shí)后，以12000 rpm 離心20分鐘，取上清液繼續(xù)滴加硫酸銨至不再生成沉淀，倒上清液，用Tris-HCl緩沖液溶解沉淀，得含鹽蛋白質(zhì)溶液 3層析脫鹽 凝膠預(yù)處理：在室溫下，將Sephadex G-75干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時(shí)，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用無(wú)鹽水洗去殘存的乙醇濾干，放于無(wú)鹽水中充分溶脹24小時(shí)，間隙攪拌，以保證凝膠的完全溶脹，然后再用0.2 mol/L HCl浸泡12小時(shí)，間隙攪拌，濾干，水洗至中性。上柱，用Tris-HCl緩沖液沖洗柱床，加將含鹽蛋白質(zhì)溶液緩慢沿壁加入到柱中，待樣品將要低于凝膠面時(shí)再滴加緩沖液，到液面高度超過(guò)5 cm時(shí)，可以繼續(xù)用緩沖液沖洗柱子。以小流速?zèng)_洗0.5 mL/min，收集既得蛋白質(zhì)樣品溶液。 以上步驟就可以得到粗蛋白了？？求高手修改，指導(dǎo)。 |
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2013-07-19 17:30:48, 12 K
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