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lmcyjxs金蟲 (正式寫手)
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[求助]
抑制差減雜交（SSH）的RNA純化要求
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如題，我想做抑制差減雜交（SSH）發(fā)現(xiàn)空白與與處理組的差異基因。但是這個(gè)RNA要求就很高。我看過(guò)相關(guān)文獻(xiàn)及使用說(shuō)明書，知道它用量大，且質(zhì)量要好。 但是關(guān)于RNA純化這一塊，在純化得到mRNA之前，是否需要先用DNA消化酶消化掉DNA再去純化mRNA比較好？如果提取得到總RNA后，直接過(guò)柱純化得到mRNA，省掉消化DNA那步，會(huì)對(duì)mRNA的質(zhì)量有很大影響嗎？mRNA純化，另外有無(wú)比較好的牌子推薦下呢？ |
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lmcyjxs
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2樓2013-07-23 14:32:36
3樓2013-07-23 16:32:56
4樓2013-07-23 16:34:33
lmcyjxs
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5樓2013-07-23 18:23:12
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【答案】應(yīng)助回帖
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我也是剛做完SSH。 總結(jié)一下，還是RNA這塊最關(guān)鍵了。。關(guān)系到這個(gè)文庫(kù)的質(zhì)量好壞。 首先：RNA肯定的是mRNA，總RNA什么的肯定不行，即使做出來(lái)文庫(kù)，也是垃圾序列居多，沒有什么價(jià)值。mRNA分離我用的是磁珠法，promego公司的，挺便宜的，質(zhì)量也不錯(cuò)，因?yàn)镾SH起始RNA量大嘛，所以沒有跑電泳，做完反轉(zhuǎn)錄之后才檢查cDNA的質(zhì)量，彌散，質(zhì)量還可以，之前一直也是各種擔(dān)心，因?yàn)槿庋酆茈y看到，mRNA有沒有提出來(lái)啊，反轉(zhuǎn)錄之后離心，能看到一點(diǎn)點(diǎn)的小沉淀的。。。如果DNA組明顯多的話，還是得加DNase消化的，對(duì)RNA影響不大。。。 正在做后續(xù)的實(shí)驗(yàn)，做SSH的小蟲貌似不多，希望能互相交流。。。做久了感覺心好累。。。感覺不會(huì)再做SSH了，老板今兒又說(shuō)再做一個(gè)文庫(kù)。。。。。 |
6樓2013-09-16 23:25:32
lmcyjxs
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以后多多請(qǐng)教啦！ 7樓2013-09-17 20:47:37
8樓2013-11-06 17:09:30
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