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[求助]
測(cè)序測(cè)不出來(lái)，求大俠幫忙，急急。。。
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| 我的載體是cosmid載體，插入片段是30-40kb 插入片段可能有重復(fù)區(qū)，但我的引物是在非重復(fù)區(qū)設(shè)計(jì)的，250bp左右，質(zhì)粒濃度大概是100ng/ul， 做pcr可以有條帶，測(cè)序是正確的，可用上下游引物雙向測(cè)序，送了兩個(gè)公司都說(shuō)沒(méi)信號(hào)，測(cè)不出來(lái)，這種情況是什么原因呢，有沒(méi)有人測(cè)過(guò)這種情況知道哪家公司可以測(cè)出來(lái)，我改怎樣解決，著急畢業(yè)，求好心人幫忙。。。 |
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2樓2013-07-26 10:50:54
3樓2013-07-26 11:28:10
4樓2013-07-26 11:42:35
★ ★
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-07-26 12:51:17
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-07-26 12:51:17
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不好意思，寫(xiě)錯(cuò)，應(yīng)該是質(zhì)粒太大。 測(cè)序反應(yīng)是這樣的，固定體積（如10ul），里面要包含dNTP buffer 酶，引物，以及模板）如果你模板質(zhì)粒太大，則相應(yīng)要多加一些模板，故要求濃度高一些，否則濃度太低會(huì)超出體積。 另外，測(cè)序反應(yīng)是一個(gè)引物的，本來(lái)擴(kuò)增效率就不是很高，再加上你的模板（質(zhì)粒太大）那就更難擴(kuò)了，所以測(cè)出來(lái)沒(méi)信號(hào)。 盡量濃...最好跟測(cè)序公司技術(shù)溝通。 |
5樓2013-07-26 12:11:18
gyesang
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6樓2013-07-26 12:54:39
7樓2013-07-26 14:05:04
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8樓2013-07-26 16:58:08
9樓2013-07-26 18:55:42
冰風(fēng)顫木
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10樓2013-07-28 21:48:48
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