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cj黑甲蟲新蟲 (初入文壇)
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[求助]
轉(zhuǎn)膜不成功
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同時(shí)做了兩塊膠，相同的進(jìn)樣。一塊用于考染，另一塊用于轉(zhuǎn)膜�？既镜某霈F(xiàn)了清晰的蛋白條帶。另一塊膠用于轉(zhuǎn)膜，轉(zhuǎn)印后，PVDF膜上有條帶清晰的預(yù)染Marker，但是用麗春紅染液對的PVDF膜及膠進(jìn)行染色，均未發(fā)現(xiàn)任何條帶。 蛋白去了那里？求解！ 轉(zhuǎn)印條件：Bio-Rad濕轉(zhuǎn)，300MA，1h，冰浴，分子量20、40、60、80KDa，PVDF膜。 另：之前用過同樣的轉(zhuǎn)印條件，轉(zhuǎn)膜成功過。 |
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Sthunder
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
cj黑甲蟲: 金幣+5, ★有幫助, 因?yàn)閃ESTERN沒有條帶才查了PVDF膜，結(jié)果就出現(xiàn)了我剛才的疑問 2013-07-30 09:20:43
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-07-31 09:19:03
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-07-31 09:19:03
| 如果mark清晰，那說明轉(zhuǎn)膜是沒喲問題的，如果你麗春紅染液沒看到條帶的話，有可能是你load量不夠，因?yàn)辂惔杭t染液靈敏度似乎不是很高，不過做western的話應(yīng)該沒太大問題！Good luck！ |
2樓2013-07-29 21:54:10
xz2001199802
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3樓2013-07-29 21:54:24
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【答案】應(yīng)助回帖
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cj黑甲蟲: 金幣+2, ★有幫助, 同一批次的立春紅染液，在之前染色的時(shí)候成功了 2013-08-09 09:37:50
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
cj黑甲蟲: 金幣+2, ★有幫助, 同一批次的立春紅染液，在之前染色的時(shí)候成功了 2013-08-09 09:37:50
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考馬斯亮藍(lán)染色比立春紅染色靈敏不止一點(diǎn)點(diǎn)，但是據(jù)樓主說立春紅染色一點(diǎn)東西都沒有我覺得不像是load太少，因?yàn)榭傆斜磉_(dá)豐度高的蛋白的，轉(zhuǎn)膜時(shí)marker都轉(zhuǎn)到膜上了，所以說轉(zhuǎn)膜應(yīng)該也沒問題，個(gè)人覺得很有可能是立春紅配錯(cuò)了，或者失效了！ 重新配立春紅，再試一試，一定要注意加冰醋酸！ |
6樓2013-08-01 17:16:41
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7樓2013-08-02 14:11:24
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