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liao504鐵蟲 (初入文壇)
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[交流]
新人誠(chéng)意請(qǐng)教，不知是否發(fā)對(duì)版面，關(guān)于農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
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| 重組質(zhì)粒凍融法轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌AGL1菌株，方法和系統(tǒng)均沒(méi)問(wèn)題，轉(zhuǎn)化后得到的colony證實(shí)是轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒，但奇怪的問(wèn)題出現(xiàn)了。構(gòu)建的重組質(zhì)粒用于敲除某基因，在質(zhì)粒上selective marker兩側(cè)插入了同源片段，即存在左右同源序列臂。用PCR驗(yàn)證農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化colony，selective marker能擴(kuò)增出，證明質(zhì)粒已轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌細(xì)胞，但當(dāng)用左右同源序列引物擴(kuò)增驗(yàn)證時(shí)發(fā)現(xiàn)一個(gè)colony只能擴(kuò)增出左臂或者右臂，隨機(jī)挑選10個(gè)colonies，大概有一半只能擴(kuò)出左臂，而另一半只能擴(kuò)出右臂。轉(zhuǎn)化用的重組質(zhì)粒驗(yàn)證無(wú)問(wèn)題，農(nóng)桿菌感受態(tài)重新制備過(guò)，其他人使用正常，以前做的也沒(méi)問(wèn)題。現(xiàn)在不知道問(wèn)題在哪了，卡在這個(gè)問(wèn)題上幾個(gè)月了。這里高人多，期望有經(jīng)驗(yàn)的老師幫忙解解惑， |
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