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lyrmy新蟲 (初入文壇)
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[求助]
含有大量重復(fù)序列的克隆
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需要P一個promoter，但是含大量重復(fù)片段，每個重復(fù)在100bp左右。6kb內(nèi)全是重復(fù)。 用過的酶： dreamtaq，NEB Q5，NEB PHUSION 試過的方法： DMSO 溫度梯度，touch down 兩段融合PCR 降低模板量 此外不僅是PCR問題。已設(shè)計不同長度promoter。一個跨過重復(fù)區(qū)的長度PCR出所需條帶，問題是連不上！不論T載還是目的載體。 這克隆做了半年了，不知這里能否遇見大牛幫忙提出建議。 |
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