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angelsamir新蟲 (初入文壇)
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[求助]
自噬新手求助
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各位好，我是做自噬的新手，主要研究某兩個基因各自在敲低水平下對自噬的影響 我是這樣誘導(dǎo)自噬的（6-well plate）：A549細(xì)胞長至70-80%，用HBSS（Invitrogen：14025-092，含鈣鎂的）誘導(dǎo)0，0.5，1，2，4，8h，用100ul RIPA裂解的細(xì)胞，WB檢測LC3B（sigma:L7543，1:2000）和p62（MBL：貨號忘了，1:1000），結(jié)果已經(jīng)貼上來了，膜給裁開了，從上往下出現(xiàn)的帶分別是（p62，β-actin，LC3B，沒帶的不用管） 我的問題是： 1.LC3B的變化怎么不明顯呢？是不是沒誘導(dǎo)出來自噬？ 2.自噬如果發(fā)生了，p62是不是一定會被降解？（前提是這個是正常A549細(xì)胞，未經(jīng)任何處理） 3.之前我做過這個細(xì)胞，0.5h時(shí)候p62完全降解了，最近做的p62完全就不降解，結(jié)果一點(diǎn)變化都沒有 4.我現(xiàn)在不知道應(yīng)該怎么往下做，希望各位大神指點(diǎn)指點(diǎn)，問題出在哪？ 3s.jpg |
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angelsamir
新蟲 (初入文壇)
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