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[求助]
電鏡前處理方法
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要用電鏡看水稻葉片的硅細(xì)胞，可是樣品怎么處理呢？要做切片吧？ [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
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【答案】應(yīng)助回帖
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透射電鏡樣品的制備（以小麥為例，參照張宏昌碩士論文《小麥新抗源一粒葡抗條銹病的組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)研究》） 采樣： 接種小麥葉片透射電鏡樣品的加工處理按康 [58] 介紹的方法進(jìn)行。接種后 7 d、9 d 時(shí)取樣，將葉片切成 0.1 cm×0.2 cm 小塊，放入 4%的戊二醛中抽真空。 制樣過(guò)程： 將采集的葉樣抽真空后固定于 4%的戊二醛 3～14h 后，用磷酸緩沖液（pH6.8）沖 洗 4 次，每次 15～20min。之后用 1%的鋨酸后固定葉樣 2h。磷酸緩沖液沖洗 4 次，每 次 15～20min。配制 30%、50%、70%、80%、90%和 100%乙醇溶液，依次對(duì)葉樣進(jìn)行 脫水，每一等級(jí)時(shí)間為 30min，100%乙醇溶液脫水 3 次。用滲透劑和包埋劑（LR-White 樹(shù)膠）進(jìn)行滲透包埋，滲透劑Ⅰ1.5 h、滲透劑Ⅱ3.5 h、滲透劑Ⅲ5 h，純包埋劑 12～24h。 然后將樣品進(jìn)行包埋，于 60℃下聚合 48h，取出樣品塊，置于干燥皿內(nèi)保存。 滲透劑組成配比為：包埋劑 : 乙醇（Ⅰ1 : 3；Ⅱ1 : 1；Ⅲ3 : 1） 切片、染色、觀察： 將修整好的樣品包被塊固定在切片機(jī)上，用鉆石刀進(jìn)行切片。將選好的切片撈于銅 網(wǎng)上。后將其置于 2%的醋酸雙氧鈾中染色 10min，再用 2%檸檬酸鉛染色 5min，用蒸 餾水洗凈，置于濾紙上自然干燥后，在 JEOL-1230 型透射電鏡下進(jìn)行觀察。 |
liyuan07211樓2013-08-21 21:42:06
2樓2013-08-14 16:47:26
3樓2013-08-14 17:16:12
4樓2013-08-14 17:17:27
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