夏南

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[求助] MC3T3細(xì)胞成骨分化時(shí)地塞米松的用量？

最近培養(yǎng)MC3T3-E1sub14向成骨細(xì)胞分化，檢測(cè)ALP活性，礦化結(jié)節(jié)等指標(biāo)。需要添加誘導(dǎo)培養(yǎng)基，但是看了好多文獻(xiàn)對(duì)誘導(dǎo)培養(yǎng)基的成分含量都不同，特別是地塞米松，有10-8M的，有10-7M的，有10-5M的，請(qǐng)問(wèn)大家實(shí)際誘導(dǎo)的時(shí)候都用的什么濃度？
PS：請(qǐng)問(wèn)誘導(dǎo)培養(yǎng)基是加了抗壞血酸、甘油磷酸鈉、地塞米松以后再過(guò)濾還是先過(guò)濾，再加入他們？過(guò)濾會(huì)不會(huì)把他們這些大分子過(guò)濾掉了？

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1樓 2013-08-21 22:11:18

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清風(fēng)小李子

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夏南(紅舟流星代發(fā)): 金幣+5, 代扣代發(fā)金幣 2013-11-30 19:34:19

你好，我們課題組一般用量為 10 mM glycerol phosphate, 0.1 mM dexamethasone, and 50 mg/ml ascorbic acid in H-DMEM containing 10% FBS and 1% penicillin–streptomycin

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2樓2013-08-22 09:59:53

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夏南

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2樓: Originally posted by 清風(fēng)小李子 at 2013-08-22 09:59:53
你好，我們課題組一般用量為 10 mM glycerol phosphate, 0.1 mM dexamethasone, and 50 mg/ml ascorbic acid in H-DMEM containing 10% FBS and 1% penicillin–streptomycin

額 ~~您確定沒(méi)有打錯(cuò)嗎？抗壞血酸你們加入的是50mg/ml？
那配一升培養(yǎng)基你們就加入50g？太夸張了吧。
你們用的細(xì)胞系不是MC3T3的吧？

不過(guò)還是謝謝你。

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3樓2013-08-22 19:18:12

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r123ed

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用sigma的 10-6~10-8m 需dmso溶解后dd水稀釋
10-5 無(wú)誘導(dǎo)作用需單獨(dú)過(guò)濾后加入培養(yǎng)基

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wangxueru

shape memory

6樓2013-08-26 15:18:17

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沒(méi)人回答嗎？頂一下。

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4樓2013-08-22 23:50:34

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iambaiyun

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一些文獻(xiàn)的地塞米松的濃度不一樣應(yīng)該與誘導(dǎo)分化的分化率與分化時(shí)間快慢有關(guān)系，建議設(shè)置幾個(gè)濃度梯度，自己認(rèn)真分析比較

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白云

5樓2013-08-24 13:34:30

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6樓: Originally posted by r123ed at 2013-08-26 15:18:17
用sigma的 10-6~10-8m 需dmso溶解后dd水稀釋
10-5 無(wú)誘導(dǎo)作用需單獨(dú)過(guò)濾后加入培養(yǎng)基

回復(fù)的時(shí)候沒(méi)有選應(yīng)助？給不了金幣呀。

恩后來(lái)我們選的就是10-8M這個(gè)濃度，

請(qǐng)教一下為什么濃度高了，10-5M反而沒(méi)有誘導(dǎo)作用了呢？

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7樓2013-08-26 16:04:58

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r123ed

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引用回帖:

7樓: Originally posted by 夏南 at 2013-08-26 16:04:58
回復(fù)的時(shí)候沒(méi)有選應(yīng)助？給不了金幣呀。

恩后來(lái)我們選的就是10-8M這個(gè)濃度，

請(qǐng)教一下為什么濃度高了，10-5M反而沒(méi)有誘導(dǎo)作用了呢？...

10-5 沒(méi)有誘導(dǎo)作用，反而嚴(yán)重抑制增殖，這只是我個(gè)人實(shí)驗(yàn)中得到的結(jié)論，具體為什么沒(méi)有深究過(guò)。因?yàn)椴煌镜厝姿煽赡懿惶粯�，我在丁香園還看到有用水溶解地塞米松的，也看到過(guò)10-4的地塞米松……

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夏南

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8樓2013-08-26 21:03:48

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8樓: Originally posted by r123ed at 2013-08-26 21:03:48
10-5 沒(méi)有誘導(dǎo)作用，反而嚴(yán)重抑制增殖，這只是我個(gè)人實(shí)驗(yàn)中得到的結(jié)論，具體為什么沒(méi)有深究過(guò)。因?yàn)椴煌镜厝姿煽赡懿惶粯樱以诙∠銏@還看到有用水溶解地塞米松的，也看到過(guò)10-4的地塞米松……...

謝謝，謝謝，非常感謝，雖然你回答之前我就用的10-8配好了，但是聽(tīng)你這么一說(shuō)，心里舒服多了，哈哈，幸虧沒(méi)選10-5.你的這個(gè)實(shí)際經(jīng)驗(yàn)真心有用呀。

你點(diǎn)個(gè)應(yīng)助吧，我好給你金幣呀。

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9樓2013-08-26 22:49:21

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xhdyw

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不加地塞米松就加抗壞血酸和β磷酸甘油之類的行么

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10樓2013-08-27 08:53:25

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