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muransun新蟲 (初入文壇)
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[求助]
如何得到microRNA的DNA序列
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剛看到一篇博士論文，不明白miR-410的表達(dá)序列是如何得到（如何查找到這個序列），合成了正反DNA序列如何通過火退火得到DAN雙鏈來插入質(zhì)粒？ 因?yàn)楸救四壳爸肿鰉iRNA方面的實(shí)驗(yàn)，需要得到mmu-miR-155前體序列，初步想法是提取小鼠的基因組，合成PCR引物，通過PCR擴(kuò)增得到目的序列。所以看到這篇文章，是否我也可以合成miRNA表達(dá)序列，通過退火就可以得到目的序列呢？疑惑，希望有高手解答 謝謝 335.png |
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這是馬甲
至尊木蟲 (著名寫手)
誰的馬甲都不是
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2樓2013-09-17 09:07:20
longweichen
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如果構(gòu)建primary microRNA過表達(dá)，只需要在pre-miRNA的兩側(cè)各加上100-200 bp的側(cè)翼序列即可，很隨意。就是加上雙臂有利于miRNA的成熟、提高表達(dá)量。參考文獻(xiàn)[1]。 1. 李嘉熙等，獲得構(gòu)建ｍｉＲＮＡ 高表達(dá)載體的ｐｒｅ-ｍｉＲＮＡ及其側(cè)翼ＤＮＡ 序列的生物信息學(xué)方法，2013. ---------------------------------- 爾東，njau10110119@163.com |
3樓2018-11-23 15:36:55
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