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求放線菌基因組DNA的提取方法
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是高溫放線Thermomonospora curvata,中文名稱彎曲熱單孢菌,用了網(wǎng)上查到的微波爐法（《微生物學(xué)報》），也許是我沒有掌握到這種方法的精髓吧，反正是效果不太好，有時提不出，有時提出的極微量，現(xiàn)在實驗就卡在這動不了了，崩潰死了。煩勞大家?guī)蛶臀野�！不勝感激了�?br />
后來用了分子克隆上的方法: (1〕取3ml培養(yǎng)過夜的細(xì)菌培養(yǎng)物離心0.5分鐘，收集菌體； 〔2〕用無菌水洗滌菌體，12000rpm，離心1分鐘； 〔3〕沉淀物加入567 u l TE（pH 8.0）緩沖液，重懸菌體，加入30 u l 溶菌酶（50mg/ml）混勻，于37℃溫育1小時； 〔4〕加入30 u l 10%的SDS和3 u l （20mg/ml）的蛋白酶K，混勻，于55℃溫育1小時； 〔5〕加入100 u l 5M Nacl, 充分混勻，再加入80 u l CTAB/Nacl 溶液，混勻，于65℃溫育10min； 〔6〕 加入2ul RNA酶，37℃溫浴15分鐘； 〔7〕加入等體積的酚/氯仿，混勻，抽提； 〔8〕加入等體積的氯仿，抽提一次； 〔9〕 加入1/10體積的3mol/L NaAc 溶液，2倍體積的無水乙醇，混勻，放置－20℃冰箱30分鐘； 〔10〕 輕輕混合直到DNA沉淀下來，離心； 〔11〕 用70%乙醇洗滌沉淀1次，晾干； 〔12〕將已干的DNA溶于40 u l 超純水中，-20℃保存。 結(jié)果電泳出來還是沒有,重復(fù)提了三天了,現(xiàn)在希望得到高手指教.... |
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4樓2007-11-25 17:24:22
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