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rhFGF21銀蟲(chóng) (小有名氣)
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求一管BL21（DE3）感受態(tài)，萬(wàn)分感激
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yanfang2012
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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【轉(zhuǎn)】感受態(tài)制備方法 基本上過(guò)程很簡(jiǎn)單： 1、從-80冰箱取出菌種，用接種環(huán)三區(qū)劃線涂板，37度培養(yǎng)。 2、從培養(yǎng)了12-16個(gè)小時(shí)的平板上挑取單菌落，要分散比較好的單克隆，加0.5-1ml LB 37度搖菌6-8小時(shí)（也可12-16小時(shí)過(guò)夜搖）。 3、將小量的菌液轉(zhuǎn)入大500ml三角燒瓶擴(kuò)增培養(yǎng)。為保證通氣良好，500ml三角燒瓶最多搖150ml菌液（100ml足以）。 4、擴(kuò)增培養(yǎng)時(shí)注意將溫度設(shè)為30度，稍低的溫度有利于控制生長(zhǎng)狀態(tài)，不會(huì)搖過(guò)。 5、培養(yǎng)2小時(shí)之后測(cè)其OD值，接近0.3以后每20min測(cè)一次，在OD值達(dá)到0.3以后即可停止培養(yǎng)（可以用水作參比，LB培養(yǎng)基與水的OD值相差無(wú)幾）。 6、在擴(kuò)增培養(yǎng)同時(shí)制備0.1M CaCl2溶液。（1M CaCl2的母液用0.22um濾膜過(guò)濾后作為儲(chǔ)存液，用時(shí)用滅菌水稀釋十倍使用） 7、培養(yǎng)好的菌液立即置于冰上，旋轉(zhuǎn)三角瓶，使其溫度迅速冷卻到0度。保持旋轉(zhuǎn)狀態(tài)10min。 8、4000rpm 4度 離心10min，棄去上清，加入0.1M CaCl2溶液。每50ml菌液加入20mlCaCl2溶液，冰上震蕩重懸。 9、4000rpm 4度 離心10min，棄去上清，加入0.1M CaCl2溶液。每50ml菌液加入2 mlCaCl2溶液，冰上震蕩重懸。 10、加入1/10體積的滅菌甘油。混勻后分裝。 要注意的問(wèn)題： 1、菌種要好，無(wú)污染。 2、所用的燒瓶、離心管應(yīng)在使用前數(shù)天用去離子水充分浸泡，去除殘留的各種離子。 3、擴(kuò)增培養(yǎng)搖菌不能搖過(guò)。 好的感受態(tài)細(xì)胞對(duì)于分子實(shí)驗(yàn)非常重要，請(qǐng)牢記細(xì)節(jié)決定成敗。祝你好運(yùn) |
10樓2013-09-04 09:53:54
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