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小木蟲論壇-學(xué)術(shù)科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 測酶活
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風(fēng)吹我已散木蟲 (正式寫手)
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[求助]
測酶活
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看到一篇文獻(xiàn)上的測酶活，有些不懂，懇請各位幫忙： 15 μl of enzyme,solution was added to 35 μl of a mix containing 25.6 μl of 50mM Tris buffer (pH 7.5), 2.5 μl of 0.1M DTE, 2.5 μl of BSA stock solution (50 mg/ml), 2.0 μl solution at 10 μCi/ml of [14C]acetyl-CoA (Sigma) in 50 mM KH2PO4, pH 4.5 (44000 d.p.m., final concentration of 9 μM in the assay), and 2.4 μl of unlabelled AcAc-CoA (Sigma) in 50 mM KH2PO4 (pH 4.5) to give an equimolar concentration in the assay. After a 10 min incubation at 30 ◦C (linear range), the reaction was stopped by addition of 6M HCl. 問題如下： 1. Tris buffer 是做什么的， PH為什么要是7.5？ 2. “ 2.0 μl solution at 10 μCi/ml of [14C]acetyl-CoA (Sigma) in 50 mM KH2PO4” 如何理解？到底是多少acetyl-CoA溶解在50 mM KH2PO4 里？ 3. “44000 d.p.m., final concentration of 9 μM in the assay” 是什么意思？ 4."2.4 μl of unlabelled AcAc-CoA (Sigma) in 50 mM KH2PO4 (pH 4.5) to give an equimolar concentration in the assay"里“give an equimolar concentration in the assay”是什么意思？ 5. 6M HCl 是什么意思呢， 是6M/L 的HCl ，還是6M HCl ？如果是后者的話是不是也太多了？前者的話到底要加多少HCL? 本人新手，太多不懂。請各位幫忙，謝謝啦。 |
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1.Tris就是Tris-Hcl啊，一般測酶活用這個緩沖液或者PBS，pH肯定是你這個酶比較適宜的，這個有什么好糾結(jié)的 2.將你的10uCi/ml的acrtyl-CoA加入pH4.5,50mM KH2PO4溶液中，終濃度是9uM，d.p.m不知道是什么的縮寫 3. equimolar是指與上面的終濃度相等的意思9uM 4.大寫M或者uM都是mol/L或者umol/L的縮寫 |
3樓2013-09-09 10:13:51
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1、Tris buffer 就是反應(yīng)緩沖液，pH7.5應(yīng)該是你那個酶的最適反應(yīng)pH 2、加2.0 μl的溶液，為 50 mM KH2PO4 的溶液里含有10 μCi/ml 的acetyl-CoA 5、6M HCl 是6mol/L的HCL。M是mol/L的縮寫。 3和4 就不清楚啦 |
2樓2013-09-09 09:34:11
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