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易錯(cuò)PCR出現(xiàn)棕褐色沉淀 用怎樣的Mn2+試劑可靠 濃度范圍大概多少？
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各位有經(jīng)驗(yàn)的師兄師姐們： 最近在做易錯(cuò)PCR，準(zhǔn)備先通過添加Mn2+來做一做，文獻(xiàn)中控制的Mn2+濃度大概在0.1~0.5mmol/L，我這次做的條件如下。 模版50ng，dNTP 0.2mmol/L each，10*PCR buffer（Takara Mg2+plus）5ul，MnCl2（梯度：0、0.05、0.1、0.2、0.3mmol/L），Taq 2U。94℃ 5min，94℃ 40s，52℃ 1min，72℃ 2min 50s 循環(huán)30次，72℃ 18min，4℃。 結(jié)果時(shí)：未加Mn2+ 條帶正確，其余的均沒有條帶。而且發(fā)現(xiàn)P完之后，PCR小管底部出現(xiàn)明顯的棕褐色沉淀，此現(xiàn)象正常嗎？？？這也太不靠譜了吧！ 此次用的MnCl2是自己利用實(shí)驗(yàn)室分析純的MnCl2·4H2O（儲液5mmol/L） 配的，是不是達(dá)不到PCR的純度，是不是非得用公司的試劑盒。我覺得易錯(cuò)PCR應(yīng)該沒那么難成功吧感覺文獻(xiàn)中都說的很簡單啊，我還是想自己先試試，求各位指點(diǎn)迷津!!!!!!!!!!!!! |
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2樓2013-09-17 21:44:17
3樓2013-09-17 22:02:54
4樓2013-09-17 22:33:11
seraphlx
新蟲 (初入文壇)
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5樓2015-10-08 20:04:20
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