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HIS-Bcl2 已有1人參與
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| 請問各位大神有沒有純化HIS-Bcl2蛋白的？要用多少mM的濃度的咪唑才能把Bcl2蛋白洗下來啊 ？？？最近做binding分析，頭大啊 急急急急�。�！ 謝謝啦 |
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2樓2013-09-28 10:54:56
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謝謝你的回復(fù)，我的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖亲鰝�(gè)PULL-DOWN 就是要把his非特異性結(jié)合的蛋白去除 具體如下：A蛋白和B蛋白，其中B蛋白帶有HIS tag ，A蛋白沒有，B 蛋白有可能和A蛋白發(fā)生相互作用，這樣的話用NI-NTA beads結(jié)合的話，B蛋白就會結(jié)合到beads上去，A蛋白也就被B蛋白拉住了。有緩沖液西區(qū)未結(jié)合的A,B蛋白就可以跑膠驗(yàn)證了。 一個(gè)問題是我們發(fā)現(xiàn)不帶his的A蛋白也能和NI-NTA結(jié)合，所以要用咪唑洗去這種非特異性結(jié)合，可是我們目前還沒有找到一個(gè)合適的濃度可以洗去這種非特異性結(jié)合，而又不能把特異性結(jié)合洗下來。 所以請教大蝦你多多指教。 |
3樓2013-09-29 08:58:57
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