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走在路上ing金蟲 (初入文壇)
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[求助]
蒽酮比色法測(cè)水稻幼苗可溶性糖、淀粉的含量 已有1人參與
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蒽酮比色法測(cè)水稻幼苗可溶性糖、淀粉的含量，包括具體的實(shí)驗(yàn)步驟，以及注意事項(xiàng) 越詳細(xì)越好 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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木蟲/panda: 金幣+2, 最好結(jié)合自己的實(shí)際經(jīng)驗(yàn)來(lái)說(shuō)說(shuō) 2014-05-13 22:27:05
走在路上ing: 金幣+6, ★★★很有幫助, 3 2014-05-17 19:32:54
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可溶性總糖的測(cè)定（蒽酮比色法） 摘要： 一、目的 掌握蒽酮法測(cè)定可溶性糖含量的原理和方法。 二、原理 強(qiáng)酸可使糖類脫水生成糠醛，生成的糠醛或羥甲基糖醛與蒽酮脫水縮合，形成糠醛的衍生物，呈藍(lán)綠色，該物質(zhì)在 620 nm 處有最大吸收 . 在 10 -100 一、目的 掌握蒽酮法測(cè)定可溶性糖含量的原理和方法. 二、原理 強(qiáng)酸可使糖類脫水生成糠醛,生成的糠醛或羥甲基糖醛與蒽酮脫水縮合,形成糠醛的衍生物,呈藍(lán)綠色,該物質(zhì)在 620 nm 處有最大吸收 . 在 10 -100ug 范圍內(nèi)其顏色的深淺與可溶性糖含量成正比. 這一方法有很高的靈敏度,糖含量在 30ug 左右就能進(jìn)行測(cè)定,所以可做為微量測(cè)糖之用.一般樣品少的情況下,采用這一方法比較合適. 三、儀器、試劑和材料 1 、儀器 （1）分光光度計(jì) （2）電子頂載天平 （3）三角瓶： 50m1 X 1 （4）大試管： 9 支 （5）試管架,試管夾 （6）漏斗,漏斗架 （7）容量瓶： 50rnl X 2 （8）刻度吸管： 1m1X3 ， 2m1X1 ， 5mlX1 （9）水浴鍋 2、試劑 （1）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液： l00ug/ml （2）濃硫酸 （3）蒽酮試劑 :0.2g 蒽酮溶于 100 ml 濃 H2SO4 中當(dāng)日配制使用. 3、材料 小麥分蘗節(jié)。 四、操作步驟 1 、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 取 7 支大試管,按下表數(shù)據(jù)配制一系列不同濃度的葡萄糖溶液： 管號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（ ml ） 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸餾水（ ml ） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（ ug ） 0 10 20 30 40 60 80 在每支試管中立即加入蒽酮試劑 4.0m1 ,迅速浸于冰水浴中冷卻,各管加完后一起浸于沸水浴中,管口加蓋玻璃球,以防蒸發(fā).自水浴重新煮沸起,準(zhǔn)確煮沸 l0min 取出,用流水冷卻,室溫放置 10min ,在 620 nm 波長(zhǎng)下比色.以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖含量（ ug) 作橫坐標(biāo),以吸光值作縱坐標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線. 2 、植物樣品中可溶性糖的提取 將小麥分蘗節(jié)剪碎至 2mm 以下,準(zhǔn)確稱取 Ig, 放入 50m1 三角瓶中,加沸水 25m1 ,在水浴中加蓋煮沸 10min ,冷卻后過(guò)濾,濾液收集在 50m1 容量瓶中,定容至刻度.吸取提取液 2m1 ,置另一 50m1 容量瓶中,以蒸餾水稀釋定容,搖勻測(cè)定. 3、測(cè)定 吸取 lml 已稀釋的提取液于大試管中,加入 4.Oml 蒽酮試劑,以下操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線制作.比色波長(zhǎng) 620nm ,記錄吸光度,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出葡萄糖的含量（ ug ）. 查表所得糖含量（ ug ）×稀釋倍數(shù) 五、結(jié)果處理 六、注意事項(xiàng) 1、該顯色反應(yīng)非常靈敏,溶液中切勿混入紙屑及塵埃. 2、 H 2 SO 4 要用高純度的. 3、不同糖類與蒽酮的顯色有差異,穩(wěn)定性也不同.加熱、比色時(shí)間應(yīng)嚴(yán)格掌握. 七、思考題 1、用水提取的糖類有哪些？ 2、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)注意哪些問(wèn)題？ |
10樓2014-05-13 16:19:25
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【答案】應(yīng)助回帖
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蒽酮比色法 1、試劑 (1)．1%蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液 將分析純蔗糖在80℃下烘至恒重，精確稱取1.000g。加少量水溶解，移入100ml容量瓶中，加入0.5ml濃硫酸，用蒸餾水定容至刻度； (2)．100μg/ml蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液 精確吸取1%蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液1ml加入100ml容量瓶中，加水定容。 (3)．蒽酮乙酸乙酯試劑：取分析純蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中 （4）標(biāo)準(zhǔn)曲線： 管號(hào) 0 1 2 3 4 5 100μg/ml蔗糖液（ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 水（ml） 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 蔗糖量（μg） 0 20 40 60 80 100 按順序向試管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯試劑和5ml濃硫酸，充分振蕩，立即將試管放入沸水浴中，逐管均準(zhǔn)確保溫1min，取出后自然冷卻至室溫，以空白作參比，在630nm波長(zhǎng)下測(cè)其光密度，以光密度為縱坐標(biāo)，以糖含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求出標(biāo)準(zhǔn)線性方程。 2、測(cè)定方法 可溶性糖的提取（鮮樣） 取新鮮甘薯樣品，擦凈表面污物，剪碎混勻，稱取1 g，放入帶刻度試管中，加入10mL 蒸餾水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取3次），提取液過(guò)濾入100mL容量瓶中，反復(fù)沖洗試管及殘?jiān)�，定容至刻度�?br /> 顯色測(cè)定 ：吸取1ml糖提取液定容至100ml，吸取樣品稀釋液2ml于20ml刻度試管中（重復(fù)2次），按順序向試管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯試劑和5ml濃硫酸，充分振蕩，立即將試管放入沸水浴中，逐管均準(zhǔn)確保溫1min，取出后自然冷卻至室溫，以空白作參比，在630nm波長(zhǎng)下測(cè)其光密度、由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得待測(cè)液的含糖量。 3、結(jié)果計(jì)算 可溶性糖含量(mg/g)=C*V/( a*m*1000) 式中 C－標(biāo)準(zhǔn)方程求得糖量(μg)；a－吸取樣品液體積(ml)；V－提取液量(ml)；m－稱樣質(zhì)量（g）。 根據(jù)不同作物，因含糖量不同，稀釋倍數(shù)自己摸索，希望對(duì)你有所幫助！ |
2樓2013-09-28 08:12:38
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9樓2014-05-13 16:16:47
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